关于膜片钳的封接总结，有问题的请进
<p>刚刚注册不久，看到有很多朋友封接有问题。我做膜片钳的时间有一些年头了，封接方面还比较有把握。回想以前总是封不上的痛苦，很想和大家分享我的经验。</p><p>膜片钳封接需要注意的因素很多，但是最重要的就是细胞状态。如果状态好，真是一封一个准。一天做上十几个很轻松。</p><p>细胞状态好从取脑、切片子开始就很需要注意。</p><p>第一要素就是速度，从断头到把脑放进液体里一定要控制在1 Min之内，我一般是30-40 S。</p><p>第二就是温度很重要，脑组织取出来之后的放置的液体（准备液）一定要有冰。以前我是把液体放在冰水里，结果发现准备液的温度总是在7-8度，后来就把准备液冻起来，做得时候里面有很多冰蓉，这样总能在4度以下，这很重要。一定要有冰。切片子的时候也要时刻保持液体是有冰的状态，要经常加冰（当然是准备液冻出来的，可不是蒸馏水冻的冰）。切完片子后把片子捞到室温下通氧的孵育液里，也有人先放到35度的孵育液几分钟然后在进室温，我觉得差别不大。</p><p>第三就是pH值，许多许多的朋友都不注意这个问题，很多人认为通氧30分钟后就能饱和，可是在实践中发现pH变化很大，很快，如果想细胞状态好，以及记录时间长（我一般都能记1个小时以上），一定要注意这个问题。我是用1%的芬红（不能完全溶解，用前摇匀），1000 ml液体里加300 ul，通过芬红的颜色控制pH值，没有经验的朋友可以先测定pH值，就知道什么颜色代表什么pH值了。很重要的，大家用起来后就知道pH值的变化很大的。需要经常注意调节通氧量来调节。</p><p>其他的就是实验方法的问题了。我不多说了，大家都知道。</p><p></p><p></p> <p>好帖就要顶，谢楼主！</p><p>这个bbs太沉闷……</p> <p>这个太有用了，已经给加为精华。</p> <p>感谢版主加精。</p><p>对了，上次忘了说液体的问题。液体我做的时候分为准备液，孵育液和灌流液。切片子是准备液，切完是孵育液。记录的时候是孵育液。Ca的浓度由低到高，Mg由高到低。都是为了使细胞状态达到最好。具体如下：</p><p class="MsoNormal" style="MARGIN: 0cm 0cm 0pt;"><b style="mso-bidi-font-weight: normal;"><span style="FONT-SIZE: 12pt; FONT-FAMILY: 宋体; mso-ascii-font-family: 'Times New Roman'; mso-hansi-font-family: 'Times New Roman';">准备液：</span></b><b style="mso-bidi-font-weight: normal;"><span lang="EN-US" style="FONT-SIZE: 12pt;"><font face="Times New Roman">Dextrose=<chmetcnv wst="on" tcsc="0" numbertype="1" negative="False" hasspace="True" sourcevalue=".3964" unitname="g">0.3964 g</chmetcnv>, <p></p></font></span></b></p><p class="MsoNormal" style="MARGIN: 0cm 0cm 0pt; TEXT-INDENT: 18pt; mso-char-indent-count: 1.5;"><span lang="EN-US" style="FONT-SIZE: 12pt;"><font face="Times New Roman">Ca<sup>2+</sup>/Mg<sup>2+</sup>=<chmetcnv wst="on" tcsc="0" numbertype="1" negative="False" hasspace="True" sourcevalue=".5" unitname="mm">0.5 mM</chmetcnv>/<chmetcnv wst="on" tcsc="0" numbertype="1" negative="False" hasspace="True" sourcevalue="6" unitname="mm">6 mM</chmetcnv><p></p></font></span></p><p class="MsoNormal" style="MARGIN: 0cm 0cm 0pt; TEXT-INDENT: 18pt; mso-char-indent-count: 1.5;"><span lang="EN-US" style="FONT-SIZE: 12pt;"><font face="Times New Roman">200 ml ACSF</font></span><span style="FONT-SIZE: 12pt; FONT-FAMILY: 宋体; mso-ascii-font-family: 'Times New Roman'; mso-hansi-font-family: 'Times New Roman';">中加</span><span style="FONT-SIZE: 12pt;"><font face="Times New Roman"><b style="mso-bidi-font-weight: normal;"><span lang="EN-US">0.1 ml</span></b><span lang="EN-US">
<chmetcnv wst="on" tcsc="0" numbertype="1" negative="False" hasspace="True" sourcevalue="1" unitname="m"><chmetcnv wst="on" tcsc="0" numbertype="1" negative="False" hasspace="False" sourcevalue="1" unitname="m">1 </chmetcnv>M</chmetcnv> Ca<sup>2+</sup></span></font></span><span style="FONT-SIZE: 12pt; FONT-FAMILY: 宋体; mso-ascii-font-family: 'Times New Roman'; mso-hansi-font-family: 'Times New Roman';">溶液和</span><font face="Times New Roman"><b style="mso-bidi-font-weight: normal;"><span lang="EN-US" style="FONT-SIZE: 12pt;">1.2 ml</span></b><span lang="EN-US" style="FONT-SIZE: 12pt;">
<chmetcnv wst="on" tcsc="0" numbertype="1" negative="False" hasspace="True" sourcevalue="1" unitname="m"><chmetcnv wst="on" tcsc="0" numbertype="1" negative="False" hasspace="False" sourcevalue="1" unitname="m">1 </chmetcnv>M</chmetcnv> Mg<sup>2+</sup></span></font><span style="FONT-SIZE: 12pt; FONT-FAMILY: 宋体; mso-ascii-font-family: 'Times New Roman'; mso-hansi-font-family: 'Times New Roman';">溶液</span><span lang="EN-US" style="FONT-SIZE: 12pt;"><p></p></span></p><p class="MsoNormal" style="MARGIN: 0cm 0cm 0pt;"><span lang="EN-US" style="FONT-SIZE: 12pt;"><font face="Times New Roman"><span style="mso-spacerun: yes;"> </span><p></p></font></span></p><p class="MsoNormal" style="MARGIN: 0cm 0cm 0pt;"><b style="mso-bidi-font-weight: normal;"><span style="FONT-SIZE: 12pt; FONT-FAMILY: 宋体; mso-ascii-font-family: 'Times New Roman'; mso-hansi-font-family: 'Times New Roman';">孵育液</span></b><b style="mso-bidi-font-weight: normal;"><span lang="EN-US" style="FONT-SIZE: 12pt;"><font face="Times New Roman">+</font></span></b><b style="mso-bidi-font-weight: normal;"><span style="FONT-SIZE: 12pt; FONT-FAMILY: 宋体; mso-ascii-font-family: 'Times New Roman'; mso-hansi-font-family: 'Times New Roman';">灌流液</span></b><b style="mso-bidi-font-weight: normal;"><span lang="EN-US" style="FONT-SIZE: 12pt;"><font face="Times New Roman">: Dextrose=<chmetcnv wst="on" tcsc="0" numbertype="1" negative="False" hasspace="True" sourcevalue="1.5856" unitname="g">1.5856 g</chmetcnv><p></p></font></span></b></p><p class="MsoNormal" style="MARGIN: 0cm 0cm 0pt;"><span lang="EN-US" style="FONT-SIZE: 12pt;"><p><font face="Times New Roman"> </font></p></span></p><p class="MsoNormal" style="MARGIN: 0cm 0cm 0pt; TEXT-INDENT: 18pt; mso-char-indent-count: 1.5;"><span style="FONT-SIZE: 12pt; FONT-FAMILY: 宋体; mso-ascii-font-family: 'Times New Roman'; mso-hansi-font-family: 'Times New Roman';">孵育液：</span><span lang="EN-US" style="FONT-SIZE: 12pt;"><font face="Times New Roman">Ca<sup>2+</sup>/Mg<sup>2+</sup>=<chmetcnv wst="on" tcsc="0" numbertype="1" negative="False" hasspace="True" sourcevalue="2" unitname="mm">2 mM</chmetcnv>/<chmetcnv wst="on" tcsc="0" numbertype="1" negative="False" hasspace="True" sourcevalue="6" unitname="mm">6 mM</chmetcnv><p></p></font></span></p><p class="MsoNormal" style="MARGIN: 0cm 0cm 0pt; TEXT-INDENT: 18pt; mso-char-indent-count: 1.5;"><span lang="EN-US" style="FONT-SIZE: 12pt;"><font face="Times New Roman">200ml ACSF</font></span><span style="FONT-SIZE: 12pt; FONT-FAMILY: 宋体; mso-ascii-font-family: 'Times New Roman'; mso-hansi-font-family: 'Times New Roman';">中加</span><font face="Times New Roman"><b style="mso-bidi-font-weight: normal;"><span lang="EN-US" style="FONT-SIZE: 12pt;"> 0.4 ml</span></b><span lang="EN-US" style="FONT-SIZE: 12pt;">
<chmetcnv wst="on" tcsc="0" numbertype="1" negative="False" hasspace="False" sourcevalue="1" unitname="m">1M</chmetcnv> Ca<sup>2+</sup></span></font><span style="FONT-SIZE: 12pt; FONT-FAMILY: 宋体; mso-ascii-font-family: 'Times New Roman'; mso-hansi-font-family: 'Times New Roman';">溶液和</span><font face="Times New Roman"><b style="mso-bidi-font-weight: normal;"><span lang="EN-US" style="FONT-SIZE: 12pt;">1.2 ml</span></b><span lang="EN-US" style="FONT-SIZE: 12pt;">
<chmetcnv wst="on" tcsc="0" numbertype="1" negative="False" hasspace="False" sourcevalue="1" unitname="m">1M</chmetcnv> Mg<sup>2+</sup></span></font><span style="FONT-SIZE: 12pt; FONT-FAMILY: 宋体; mso-ascii-font-family: 'Times New Roman'; mso-hansi-font-family: 'Times New Roman';">溶液</span><span lang="EN-US" style="FONT-SIZE: 12pt;"><p></p></span></p><p class="MsoNormal" style="MARGIN: 0cm 0cm 0pt;"><span lang="EN-US" style="FONT-SIZE: 12pt;"><p><font face="Times New Roman"> </font></p></span></p><p class="MsoNormal" style="MARGIN: 0cm 0cm 0pt; TEXT-INDENT: 18pt; mso-char-indent-count: 1.5;"><span style="FONT-SIZE: 12pt; FONT-FAMILY: 宋体; mso-ascii-font-family: 'Times New Roman'; mso-hansi-font-family: 'Times New Roman';">灌流液：</span><span lang="EN-US" style="FONT-SIZE: 12pt;"><font face="Times New Roman">Ca<sup>2+</sup>/Mg<sup>2+</sup>=<chmetcnv wst="on" tcsc="0" numbertype="1" negative="False" hasspace="True" sourcevalue="2.4" unitname="mm">2.4 mM</chmetcnv>/<chmetcnv wst="on" tcsc="0" numbertype="1" negative="False" hasspace="True" sourcevalue="1.2" unitname="mm">1.2 mM</chmetcnv><p></p></font></span></p><p class="MsoNormal" style="MARGIN: 0cm 0cm 0pt; TEXT-INDENT: 18pt; mso-char-indent-count: 1.5;"><span lang="EN-US" style="FONT-SIZE: 12pt;"><font face="Times New Roman">600ml ACSF</font></span><span style="FONT-SIZE: 12pt; FONT-FAMILY: 宋体; mso-ascii-font-family: 'Times New Roman'; mso-hansi-font-family: 'Times New Roman';">中加</span><span style="FONT-SIZE: 12pt;"><font face="Times New Roman">
<b style="mso-bidi-font-weight: normal;"><span lang="EN-US">1.44 ml</span></b><span lang="EN-US">
<chmetcnv wst="on" tcsc="0" numbertype="1" negative="False" hasspace="False" sourcevalue="1" unitname="m">1M</chmetcnv> Ca<sup>2+</sup></span></font></span><span style="FONT-SIZE: 12pt; FONT-FAMILY: 宋体; mso-ascii-font-family: 'Times New Roman'; mso-hansi-font-family: 'Times New Roman';">溶液和</span><font face="Times New Roman"><b style="mso-bidi-font-weight: normal;"><span lang="EN-US" style="FONT-SIZE: 12pt;">0.72 ml</span></b><span lang="EN-US" style="FONT-SIZE: 12pt;">
<chmetcnv wst="on" tcsc="0" numbertype="1" negative="False" hasspace="False" sourcevalue="1" unitname="m">1M</chmetcnv> Mg<sup>2+</sup></span></font><span style="FONT-SIZE: 12pt; FONT-FAMILY: 宋体; mso-ascii-font-family: 'Times New Roman'; mso-hansi-font-family: 'Times New Roman';">溶液</span><span lang="EN-US" style="FONT-SIZE: 12pt;"><p></p></span></p><p><p>合起来是1000 ml，dextrose就是葡萄糖是1.982g.</p></p><p>最后想说的是，希望大家能多交流，心得能和更多的人分享。我看到了太多藏着掖着不愿意告诉别人的人了，总觉得很遗憾。如果每人知道一点却不愿意说只能是所有人都低水平徘徊。只有多交流才能共同促进，共同提高。</p> 记录的时候是灌流液，写错了，sorry <p>论坛就是需要你这样的活跃分子。</p> 好帖子，我是刚开始做脑片，有好多问题请教啊 感谢楼主的分享！顶了再看。
页:
[1]