macgene 发表于 2010-3-17 10:56:39

迈晨科技供应 增强型磷酸钙转染试剂

试剂盒简介：
增强型磷酸钙转染试剂是本公司在传统试剂的基础上开发出的高效、低毒型细胞转染试剂。适合实验室常规瞬时细胞转染，并可用来筛选稳定表达克隆。本产品尤其适合在HEK 293细胞中进行逆转录病毒的包装，克服了脂质体等阳离子载体对细胞内病毒包装的抑制。增强型磷酸钙试剂对DNA的结合容量超过其它常用转染试剂，供转染的DNA片断可达到100kb。
试剂盒组分：
A：HBS （增强型）；B： CaCl2 , 2M
实验操作流程：
        按照60％左右的密度种植细胞入培养皿（瓶），细胞贴壁生长12-24小时后即可准备转染
        准备1.5ml离心管，按照表一依次加入DNA、HBS和CaCl2
        振荡混匀后室温静置15分钟
        吹打3－5次后均匀加到待转染细胞的培养液中，轻轻摇动培养皿（瓶）
        放入CO2孵箱继续培养
        转染5小时后换液（该步骤可以省略）
        24小时后检测目的蛋白质的表达
表一 、
Cell culture device        12-well        6-well        6-cm        10-cm        15-cm
Medium(mL)        1        3        5        10        20
DNA(g)        1        2        4        7.5        15
HBS(mL)        0.1        0.2        0.5        1        1
CaCl2L)        7        14        33        67        67
注：如果您使用的细胞培养装置不在上表内，请根据细胞培养面积进行换算


       
图一、HEK 293细胞转染pCMV-GFP 24小时后用荧光显微镜观察GFP的表达。左图：GFP；右图：相差图像。

macgene 发表于 2010-8-30 10:35:17

      {:4_94:}

macgene 发表于 2010-11-11 09:44:14

{:3_42:} 不错
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