细胞培养实验中常见的问题
1. 关于细胞培养的培养基和血清每一细胞株均有其特定使用且已适应的细胞培养基， 若骤然更换培养基细胞大都无法立即适应， 造成细胞无法存活。血清是细胞培养上一个极为重要的营养来源，所以血清的种类和品质对于细胞的生长会产生极大的影响。来自不同物种的血清，在一些物质或分子的量或内容物上都有所不同，血清使用错误常会造成细胞无法存活。
2. 血清的保存和解冻
血清应保存在-5℃至-2O℃。若存放于4℃时，请勿超过一个月。若一次无法用完一瓶，建议无菌分装血清至恰当的灭菌容器内，再放回冷冻。 将血清从冷冻冰箱取出后，先置于2～8℃冰箱使之融解，然后在室温下使之全融。但必须注意的是，融解过程中必须规则地摇晃均匀。
3. 培养细胞时关于CO2的使用
一般培养基中大都使用HCO3-/CO32-/H+ 作为pH 的缓冲系统， 而培养基中NaHCO3 的含量将决定细胞培养时应使用的CO2 浓度。当培养基中NaHCO3 含量为每公升3.7 g 时，细胞培养时应使用10 % CO2；当培养基中NaHCO3 为每公升1.5 g 时，则应使用5 % CO2 培养细胞。
4. Hank's 平衡盐溶液(HBS)和Earle's平衡盐溶液(EBS)有之间的功能差别
HBS和 EBS 的主要差别在于碳酸氢钠的水平，在Eagles (2.2g/L)中比在Hanks (0.35g/L) 中高。碳酸氢钠需用高水平的CO2平衡，以维持溶液的PH值。Eagles液在空气水平的CO2 中，溶液会变碱，Hanks液在CO2培养箱中会变酸。如果希望在CO2培养箱中保存组织，需要用Eagles液。如果仅仅是清洗将要在细胞培养基中储存的组织，用Hanks液就可以了。
5. 悬浮性细胞传代的处理
一般仅需持续加入新鲜培养基于原培养角瓶中， 稀释细胞浓度即可，若培养液太多时，可将培养角瓶口端稍微抬高，直到无法容纳为止。分瓶时取出一部份含细胞的培养液至另一新的培养角瓶， 加入新鲜培养基稀释至适当浓度，重复前述步骤即可。欲回收动物细胞，其离心速率一般为1,000rpm)，5 - 10 分钟，过高转速将造成细胞死亡。
6. 如何避免细胞污染
细胞污染的种类可分成细菌、霉菌、病毒和支原体。主要的污染原因为无菌操作技术不当、操作室环境不佳、使用遭受污染的血清和细胞等。应该严格无菌操作技术，建立清洁的环境，使用正规渠道的细胞来源和培养基等来减少污染的机会。
7.细胞发生污染时的处理方法
细胞遭受细菌真菌污染容易观察到，大多数遭受支原体污染的细胞株，除极有经验之专家外， 无法以其外观分辨。苏州先达基因细胞支原体快速检测试剂盒，操作简单，20min出结果；结果准确，特异性强，可检测超过130种支原体；高灵敏度，可低至数十拷贝。
细胞遭受支原体污染最直接的方法是灭菌后丢弃掉，以避免污染其它细胞株。如果培养的细胞非常重要，研究者可试图消除或控制污染。首先，确定污染物是细菌、真菌、支原体或酵母，把污染细胞与其它细胞系隔离开，用实验室消毒剂消毒培养器皿和超净台，检查HEPA过滤器。高浓度的抗生素和抗霉菌素可减轻细胞的污染程度。
8.支原体污染会对细胞培养有何影响？
支原体污染可影响所有细胞的生长参数， 代谢及研究数据的准确性。所以进行实验前，必须确认细胞是没有遭受支原体污染的，这样的实验结果和数据才有意义。
9.胰蛋白酶中加入EDTA的目的
二价离子会抑制胰蛋白酶活性。EDTA用来螯合游离的镁离子和钙离子，以便保持抑制胰蛋白酶的活性。建议胰蛋白酶处理细胞前，用EDTA清洗细胞，以消除来自培养基中所有的二价离子。
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