大鼠骨髓间充质干细胞的分离培养-北京百奥思科生物分享
细胞培养技术也叫细胞克隆技术，在生物学中的正规名词为细胞培养技术。通过细胞培养得到大量的细胞或其代谢产物。因为生物产品都是从细胞得来，所以可以说细胞培养技术是生物技术中最核心、最基础的技术。原代细胞具有高度的灵敏性，是现代生物学技术中常用的细胞之一，原代细胞分离培养技术也是生物技术中常用的技术。下面介绍一种常用的酶消化法分离BMSC的方法。No.1
分离方法
BMSC 的分离：取 4 周龄雄性大鼠颈椎脱臼处死，75% 乙醇浸泡 15 min。无菌条件下分离胫骨、股骨，剪开胫骨、股骨干骺端，再用 1 ml 注射器吸取预冷磷酸盐缓冲液（phosphate buffered saline，PBS）冲洗骨髓腔，获得骨髓细胞悬液，置于含有 10% FBS 和双抗（青霉素 100U/ml、链霉素 100U/L，PH：7.2-7.4）的 DMEM/F-12 中，37 ℃、95%湿度和 5% CO2 培养箱中培养。24 h后首次半量换液，然后每 3 d 全量换液。
BMSC 的传代：当黏附细胞长到 80% 融合时可进行细胞传代。倒掉培养瓶中的液体，PBS 冲洗 3 次，加入 0.25% 胰蛋白酶 0.5 mL，轻摇摇动培养瓶，然后培养箱中孵育 5 min。孵育结束后立即倒掉胰酶，迅速加入 0.5 mL FBS 终止消化，然后加入 5 mL PBS，用移液器轻轻吹打瓶底细胞，传代比例为 1：3。
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