刚果红染色实验,鉴别淀粉样变及分型其他染色无法比拟-百奥思科生物 !
淀粉样物质是一种无固定形状的细胞外嗜酸性物质,可存在于不同的组织、器官,导致的疾病称为淀粉样变。淀粉样蛋白沉积于组织或器官引起的慢性代谢性疾病,可侵犯全身多种器官,也可仅局限于皮肤。
淀粉样物质主要是由蛋白质构成,该蛋白大部分排列成反向的β-折叠层结构。在电子显微镜下淀粉样物质呈原纤维排列,病例材料中为大量细胞外的不分支的细丝,大多随机排列。此类蛋白质的化学反应类似淀粉,实际与淀粉无关。
通常无法用已知病因解释时可用活体组织检查为依据,用于识别淀粉样物质的组织学方法有甲紫染色、刚果红染色、偏振光显微镜观察等。
目前研究发现传统的甲紫染色法灵敏度低、特异性差,经典的而且有效的方法是刚果红染色,1922年Bennhold发现了刚果红可以用于活体内淀粉样物质的鉴别,并应用到组织切片。
01
试剂配制
甲醇刚果红染液: 刚果红 0.5 g 甲醇 80 ml 甘油 20 ml
碱性乙醇分化液: 氢氧化钾 0.2 g 80%乙醇 100 ml
02
染色步骤
(1)切片脱蜡至水(和常规染色处理方法一致)
(2)甲醇刚果红染液染10~20分钟
(3)用碱性乙醇分化液分化数秒,水洗
(4)苏木素复染2分钟,水洗
(5)脱水,透明,封固
03
结果
淀粉样物呈桔红色。
04
类淀粉染色的应用
确定淀粉样变性及玻璃样变性的胶原组织,后者在刚果红法染色后呈淡桔色,常用于诊断甲状腺髓样癌和胰岛细胞瘤等。
05
注意事项
(1)切片脱蜡应尽量干净,否则影响染色效果。
(2)刚果红染色液染色时尽量采用浸染,如果滴染,应置于湿盒防止溶液挥发。
(3)分化时间较短,胶原纤维也被染成红色;分化过度,淀粉样物质也被脱色。如果脱色过度,可以将切片清洗后重新用刚果红染色液浸染。
例图:红色:淀粉样物质蓝色:细胞核
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