PCR扩增和测序的引物设计

PCR扩增和测序的引物设计
（菲尔原则）
1. 平均引物长度(模板同源区)：20bp
2. G+C含量尽可能接近50％
3. G和C残基十分均匀地分布于引物中(不要全部集中在一块)
4. 引物3'末端大多数应当符合如下模式：……SSW
S代表一个G或C残基，W代表一个A或T残基
5. 5'端大多数核甘酸对应的模式是“SS……”
6. 检查所有引物防止形成“引物二聚体”，也就是单个引物或一套引物在3'端都不能相互粘着
7. 限制酶识别位点可以合成在引物的5'末端
8. 碱基错配允许在引物中发生，但不能发生在3'末端的9个碱基中
9. 再次检查引物和目标序列是否匹配，目标序列是否从5'到3'开始复制

PCR引物设计及软件使用技巧

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