肠腑康胶囊制剂提取工艺的研究分享

肠腑康胶囊制剂提取工艺的研究分享

   中国药业人才网：肠腑康胶囊A是由黄芪、党参、炒白术、陈皮、木香、茯苓、炒山楂、干姜、甘草等中药提取精制而成,具有益气健脾、止泻解毒的功效。用于治疗脾虚气滞型溃疡性结肠炎、结肠炎之腹痛、腹泻、黏液便或脓血便者[1]。本试验在提取溶剂不变的条件下,以干膏率及橙皮苷含量为指标,采用正交设计法对肠腑康A胶囊的水提取工艺条件进行优选。

　　仪器与试药

　　日本岛津LC-2010型高效液相色谱仪；Class-VP色谱数据工作站。橙皮苷(中国药品生物制品检定所,批号110721- 200613)；甲醇为色谱纯,其余试剂均为分析纯。

　　方法与结果

　　橙皮苷的含量测定方法

　　对照品溶液的制备

　　精密称取橙皮苷对照品2.85 mg,置于25 mL量瓶中,加甲醇适量,超声2 min使溶解,加甲醇稀释至刻度,摇匀,作为对照品储备液。精密量取该储备液2 mL,置于10 mL容量瓶中,加甲醇稀释至刻度,作为对照品溶液(0.022 8 mg/mL)。

　 供试品溶液的制备

　　按照处方量称取黄芪、党参、炒白术、甘草、木香、陈皮、茯苓、炒山楂、干姜等中药,置回流提取器中,按L9(34)正交表安排试验,回流提取,提取液过滤,合并,浓缩至稠膏,置烘箱中80 ℃干燥。精密称取干燥品约0.5 g,精密称定,加20 mL甲醇超声提取20 min,过滤并定容于25 mL 量瓶中,0.45 μm微孔滤膜过滤,作为供试品溶液。

　　阴性样品溶液的制备

　　除陈皮外,取处方量的黄芪、党参、炒白术、木香等其他药味,加8倍量水回流提取3次,每次1.5 h,合并滤液,浓缩,干燥。按“2.1.2”项制备方法制备。

　　色谱条件与系统适用性试验

　　色谱柱：Lichrosper C18 (250 mm×4.6 mm,5 μm)；流动相：甲醇-醋酸-水(35∶4∶61)；检测波长：283 nm。进样量：10 μL；柱温：40 ℃；流速：1.0 mL/min。理论塔板数按橙皮苷峰计算应不低于2 000[2-3]。在该色谱条件下,所用中药中的其他成分对橙皮苷的测定无干扰。色谱图见图1。

　　方法学考察

　　橙皮苷含量测定的线性回归方程为：Y＝1 803 443X－159 19(r＝0.999 6),线性范围为：0.165 6～4.968 μg,精密度试验RSD＝0.614%,稳定性试验RSD＝0.825%,重复性试验RSD＝0.40%,加样回收率试验的平均回收率为99.91%,RSD＝1.56%(n＝6)。

　　测定法

　　分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10 μL,注入液相色谱仪,测定峰面积,以外标法计算含量,即得。

　　干膏率的测定

　　精密量取“2.1.2”项下提取液250 mL,置已干燥至恒重的蒸发皿中,在水浴上蒸干后,于105 ℃干燥3 h,置干燥器中冷却30 min,迅速精密称定重量,计算干膏率。干膏率(%)＝WV/250 W0×100%(W为250 mL药液的干膏重量；V为提取液的体积；W0为药材重量)。

　　提取工艺的正交设计

　　采用L9(34)正交表,以干膏率、橙皮苷的提取量为指标,以加水量、煎煮次数、煎煮时间为因素,每个因素取三水平进行考察,通过正交试验确定最佳工艺条件。正交试验因素水平见表1。表1  正交试验因素水平表（略）

　   正交试验结果及方差分析

　　照1～9号试验条件及供试品溶液的制备方法制备样品,测定提取液中橙皮苷含量及干膏率,结果见表2。方差分析结果见表3。表2  正交试验结果（略）注：采用综合评分进行数据分析,浸膏得率、橙皮苷含量权重系数分别 为0.6、0.4表3  方差分析表（略）注：F0.05(2.2)＝19.0

　　以干膏率、橙皮苷含量为考察指标,经正交试验,根据直观分析及方差分析,由表2结果可以看出,各因素对试验结果重要性为B＞A＞C,且A1和A2、C2和C3差别不大；表3的方差分析结果表明,仅煎煮次数对试验结果的影响有统计学意义。参考经济省时原则,综合考虑,得出最佳工艺为A2B1C2,既处方量药材用8倍量水,回流提取3次,时间为1.5 h。

　　验证试验

　　按处方比例称取药材3份,按优选工艺条件进行重复验证试验,结果表明,正交试验优选的工艺条件较好,结果稳定可行、可靠,见表4。表4  验证试验结果（略）

　　最后讨论

　　 根据国家食品药品监督管理局对中药新药开发的要求,提取工艺考察含量测定指标应为君药有效成分的含量测定,即黄芪甲苷或黄芪多糖,但研究发现,黄芪甲苷在本制剂中消失而检不出,经分析可能是方中药味之间发生相互反应,具体原因正在研究；黄芪多糖在目前技术水平条件下检测技术不够成熟。处方中陈皮药效研究较清楚,易检测,故选择橙皮苷含量作为工艺考察指标。

　　 根据肠腑康胶囊A处方中各味药如黄芪、党参、白术等的中药化学和中药药理研究结果,肠腑康胶囊A的有效成分多为水溶性成分,故确定干膏率在方差分析时占权重系数较大。
   
　　本试验结果表明,所选择的3个因素对提取工艺有不同的影响,其中提取次数影响较为显着,加水量及提取时间对提取无显着影响,为了节时及节能,选择用8倍量水、回流提取3次,每次1.5 h。

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