电泳过程中内源性生物素蛋白的问题

如果我可以用牛奶或牛血清白蛋白，可以BLOCK硝酸纤维素膜吗？我似乎有很高的背景和非特异性结合。

我所做的就是封闭我的膜用5％BSA的TBS在室温为4小时。然后，我在TBS链霉亲和素-HRP（无阻挡缓冲区）在室温下为2小时。然后，我洗了4倍，15分钟，TBST（1L％的TBS吐温毫升）。我加入1毫升的SuperSignal化学发光，然后拍摄我的膜。似乎没有这表明，链霉亲和有约束力的非特异性之间的任何变化。

我的印象，牛奶有内源性生物素蛋白，我不能用它来封闭。是不是？！

封闭牛奶膜不增加生物素/链霉亲和素系统的背景。在使用一些凝集素或磷酸化特异性抗体的检测时，用BSA更好些。

真核生物中包含一些内源性生物素蛋白（通常是羧基），这些通常是线粒体，在MILK中是没有的。事实上，如果有的话，使用MILK可以减少WESTERN非特异的信号（可能是由少量游离生物素在阻塞链亲和素的结合位点）。
通过在封闭的牛奶和一抗，已经产生良好的印迹。然后TBST洗涤（去除游离生物素）。

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