提取悬浮细胞RNA

提取悬浮细胞RNA

提取RNA
器械：离心管2支，吸管4个，酒精灯，打火机，记号笔，200ul,1000UL枪，DEPC泡过的枪头EP管，紫外照过的手套。滤纸，DEPC纯水（750ml无水乙醇＋150mlDEPC水,剧烈振荡，使劲的摇晃，直至混匀），氯仿，75％酒精，异丙醇，Trizol，预冷的离心机（两种），EP管架（洗液擦洗）
过程：
1.     取细胞悬液，室温下离心，1000rmp/min,6min,弃上清（此时可预冷另一个离心机）
2.     带手套，加Trizol 1ml/5-10*10(6)个，反复吹打，溶解均匀细胞（轻吸，不要倒吸倒棉花上，初次就选用大的吸管）
3.     带双层手套，混合好的样品全部移置到0.1ml的EP管中，室温15－30度静置5分钟
4.     加入0.2ml氯仿/1mlTrizol,盖好EP管，剧烈振荡（上下颠倒），15秒钟，室温静置2－3min
5.     2－8度，离心，10500rpm/min，15min,取上清，用200ul在20ul刻度使用，小心不要使界面混淆，剩余界面上不要）
6.     上清中加入等量的异丙醇(一般是0.5:1),颠倒5次（用200ul枪加小心），室温静置10min
7.   2-8度离心，10500rmp/min,10min,弃上清
8.   RNA洗涤：75％酒精（这次用的100％。未影响）1ml沉淀，轻轻弹其底部（直接放入－70度冰箱可以长期保存，静置几秒钟
9． 2－8度离心，8500rpm/min,5min ,弃上清
10． 取出滤纸，将EP管敞开放在滤纸上，管口向酒精灯（不要完全干燥，不好溶解）
11.     DEPC水溶解（30ul,可变），分装,2ul电泳，2ul比色，其余5ul分装至于手套中冻于－20度中