引物Tm为71度,在50度的退火温度下，RACE得到的片段有没可能是特异性的目的片段？

bioman · 发表于 2005-8-8 15:36:00

引物Tm为71度，RACE PCR时用梯度退火温度，有没可能在50度退火温度下，得到特异的目的片段？我两次不同引物Tm各位71度和80度，结果两次的RACE拉出来片段好象都不是目的片段。高于55度的退火温度就来不出来了。

［此帖子已被 bioman 在 2005-8-8 16:12:57 编辑过］

runma · 发表于 2005-8-14 09:04:00

当然有可能，不过还是的测序决定；但是另一方面，高于55C就没有的话，我很怀疑不是目的片断

maylikesun · 发表于 2005-10-10 01:10:00

跑marker，如果p出来的大小和目的条带差不多的话一般可以认为是特异性目的条带，当然最准确的结果还是要测序了

thinker · 发表于 2009-3-31 07:50:42

想要增加特异性，就要提高ANNEALING温度.　当然最后的结果要测序来决定。

说爱我巴 · 发表于 2010-9-24 01:50:07

我的一天就这样的过去啦,上上网,逛下水

nrmrn · 发表于 2011-11-26 02:30:37

强强强～～，太好了，谢谢

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