膜蛋白western blotting

这是俺的protocol:
1. 在1.5ml Eppendorf管中加300ul蒸馏水,用牙签加入细胞.
2. vortex后10,000rpm离心5'.
3. 加250ul蛋白质裂解缓冲液.
4. 超声波处理两次,每次25''.(从此步骤起,所有操作都应在低温进行.)
5. 14,000rpm离心20'.
6. 收集上清,-20度保存.(soluble proteins)
7. 往沉淀加200ul蛋白裂解缓冲液,vortex,14,000rpm离心5'.
8. 弃去上清,往沉淀加100ul membrane solubilization缓冲液.
9. 超声波处理5',-20度保存,即为膜蛋白.

蛋白裂解缓冲液:
Tris HCl (pH8.0)  0.75M
蔗糖              15%
2-巯基乙醇        100mM

membrane solubilization缓冲液:
蛋白裂解缓冲液:8M尿素=4:1 (体积比)

[系统提示]:
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