细胞在发生凋亡时，会激活一些DNA内切酶，这些内切酶会切断核小体间的基因组DNA。细胞凋亡时抽提DNA进行电泳检测，可以发现180-200bp的DNA ladder。基因组DNA断裂时，暴露的3’-OH可以在末端脱氧核苷酸转移酶(Terminal Deoxynucleotidyl Transferase, TdT) 的催化下加上荧光素 (FITC) 标记的dUTP (fluorescein-dUTP) ，从而可以通过荧光显微镜或流式细胞仪进行检测，这就是TUNEL (TdT-mediated dUTP Nick-End Labeling) 法检测细胞凋亡的原理

实验方法

对于贴壁细胞或细胞涂片

a. PBS或HBSS洗涤一次。

b. 如果细胞贴得不牢，可以干燥样品使细胞贴得更牢。

c. 用4%多聚甲醛或碧云天生产的免疫染色固定液(P0098)固定细胞30-60分钟。

d. 用PBS或HBSS洗涤一次。

e. 加入含0.1% Triton X-100的PBS，冰浴孵育2分钟。

f. 转步骤5。

对于悬浮细胞或细胞悬液

a. 收集细胞(不超过200万细胞)，PBS或HBSS洗涤一次。

b. 用4%多聚甲醛固定细胞30-60分钟。为防止细胞聚集成团，宜在侧摆摇床或水

平摇床上缓慢摇动的同时进行固定。

c. 用PBS或HBSS洗涤一次。

d. 用含0.1% Triton X-100的PBS重悬细胞，冰浴孵育2分钟。

e. 转步骤5。

对于石蜡切片

a. 二甲苯中脱蜡5-10分钟。换用新鲜的二甲苯，再脱蜡5-10分钟。无水乙醇5分钟。90%乙醇2分钟。70%乙醇2分钟，蒸馏水2分钟。

b.滴加20μg/ml不含DNase的蛋白酶K，20-37℃作用15-30分钟(不同组织的最佳作用温度和时间需自行摸索)。

c. PBS或HBSS洗涤3次。注意：这一步必须把蛋白酶K洗涤干净，否则会严重干扰后续的标记反应。

d. 转步骤5。

对于冷冻切片

a. 用4%多聚甲醛固定细胞30-60分钟。

b. PBS或HBSS洗涤2次，每次10分钟。

c. 加入含0.1% Triton X-100的PBS，冰浴孵育2分钟。

d. 转步骤5。

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