siRNA质粒载体构建技术服务
RNAi (RNAinterference, RNA干扰)技术,即将与内源 mRNA 编码区同源的小片段(19 -23bp)外源双链 RNA(double s`tranded RNA )导入细胞中,通过一系列细胞内反应引发细胞中相应 mRNA 的降解,从而导致特定基因表达沉默的一种技术。RNAi的作用提供了一种经济、快捷、高效的抑制特异基因表达的技术手段,有助于研究该基因在生物模型系统中的作用,是研究基因功能的重要工具,并且逐步成为病毒性疾病、遗传性疾病以及肿瘤等的基因治疗研究的一种手段 siRNA构建技术服务 闪晶公司提供siRNA 载体的构建服务,siRNA 载体可以在细胞内直接转录出 shRNA ,其干扰效果等同于siRNA ,而且能够解决 siRNA干扰时间短的缺点。您只需提供需干扰基因的详细信息,包括基因的 mRNA 序列,Genbank Accession No. 和所属物种,本公司负责设计3条针对目的mRNA的siRNA 靶序列,在短时间内构建三个可用于目的mRNA干扰实验的siRNA 载体。可以为您节省大量的时间与精力。此方法是多种siRNA制备方法中唯一可以进行长期基因沉默研究的方法。 闪晶生物siRNA载体构建服务程序: 1. siRNA表达载体的选用: 本公司选用的siRNA 表达载体含新霉素抗性基因和GFP绿色萤光标记,可以建立稳定表达系,同时可以实时监测载体在细胞中的转染效率。载体中还含有Amp抗性基因,可以无限扩增。可以访问如下网址:http://www.genscript.com/rnai_vector.html 2. 设计siRNA靶序列 A 、根据目的mRNA序列,设计3条RNA干扰靶序列,靶序列一般为19 - 21nt 长。 可以访问如下网址:http://www.genscript.com/ssl-bin/app/rnai B 、对于每条选定的siRNA 靶序列,设计 siRNA 正义链和反义链,以 loop(9nt) 相连,称为 shRNA(short hairpin RNA)。 可以访问如下网址:http://www.genscript.com/ssl-bin/app/rnai?op=known C、阴性对照的设立,可以访问如下网址:http://www.genscript.com/ssl-bin/app/scramble 3. 合成模板: 合成每条编码 shRNA的DNA 模板的两条单链,退火 DNA 单链得到 shRNA 的 DNA 双链模板。模板链后面接有RNA PolyIII聚合酶转录中止位点,同时两端分别设计 BamHI 和 HindIII 酶切位点,可以克隆到 siRNA 载体多克隆位点的 BamHI 和 HindIII 酶切位点之间。 4. siRNA 空载体用BamHI和HindIII双酶切后,1 %琼脂糖凝胶电泳,回收线性载体。 5. 连接与转化: 把退火的DNA模板双链连接到线性载体中。采用T4连接酶,插入片断与载体的摩尔比约为 3 : 1 。连接产物转化DH5α大肠杆菌,在LB Amp培养基上涂板,37 ℃培养过夜。 6. PCR 鉴定 7. 测序鉴定 8.柱抽提阳性克隆载体并定量。 收费标准 个数 | 价格(¥) | 时间 | 1-3个siRNA表达载体构建 | 1800.00/个 | 14个工作日 | 4-10个siRNA表达载体构建 | 1500.00/个 | 20个工作日 | 10个以上 | 协商 | 协商 |
联系电话:021-54460831-11 E-mail:master@shinegene.org.cn 乘车路线:火车站坐1号地铁到徐家汇站,然后坐205路车到桂林路站或者打车到公司地址即可。 。 [em22][em22] |