关于膜片钳的封接总结，有问题的请进

刚刚注册不久，看到有很多朋友封接有问题。我做膜片钳的时间有一些年头了，封接方面还比较有把握。回想以前总是封不上的痛苦，很想和大家分享我的经验。

膜片钳封接需要注意的因素很多，但是最重要的就是细胞状态。如果状态好，真是一封一个准。一天做上十几个很轻松。

细胞状态好从取脑、切片子开始就很需要注意。

第一要素就是速度，从断头到把脑放进液体里一定要控制在1 Min之内，我一般是30-40 S。

第二就是温度很重要，脑组织取出来之后的放置的液体（准备液）一定要有冰。以前我是把液体放在冰水里，结果发现准备液的温度总是在7-8度，后来就把准备液冻起来，做得时候里面有很多冰蓉，这样总能在4度以下，这很重要。一定要有冰。切片子的时候也要时刻保持液体是有冰的状态，要经常加冰（当然是准备液冻出来的，可不是蒸馏水冻的冰）。切完片子后把片子捞到室温下通氧的孵育液里，也有人先放到35度的孵育液几分钟然后在进室温，我觉得差别不大。

第三就是pH值，许多许多的朋友都不注意这个问题，很多人认为通氧30分钟后就能饱和，可是在实践中发现pH变化很大，很快，如果想细胞状态好，以及记录时间长（我一般都能记1个小时以上），一定要注意这个问题。我是用1%的芬红（不能完全溶解，用前摇匀），1000 ml液体里加300 ul，通过芬红的颜色控制pH值，没有经验的朋友可以先测定pH值，就知道什么颜色代表什么pH值了。很重要的，大家用起来后就知道pH值的变化很大的。需要经常注意调节通氧量来调节。

其他的就是实验方法的问题了。我不多说了，大家都知道。

好帖就要顶，谢楼主！

这个bbs太沉闷……

这个太有用了，已经给加为精华。

感谢版主加精。

对了，上次忘了说液体的问题。液体我做的时候分为准备液，孵育液和灌流液。切片子是准备液，切完是孵育液。记录的时候是孵育液。Ca的浓度由低到高，Mg由高到低。都是为了使细胞状态达到最好。具体如下：

准备液：Dextrose=0.3964 g,

Ca²⁺/Mg²⁺=0.5 mM/6 mM

200 ml ACSF中加 0.1 ml 1 M Ca²⁺溶液和1.2 ml 1 M Mg²⁺溶液

 

孵育液+灌流液: Dextrose=1.5856 g

 

孵育液：Ca²⁺/Mg²⁺=2 mM/6 mM

200ml ACSF中加 0.4 ml 1M Ca²⁺溶液和1.2 ml 1M Mg²⁺溶液

 

灌流液：Ca²⁺/Mg²⁺=2.4 mM/1.2 mM

600ml ACSF中加 1.44 ml 1M Ca²⁺溶液和0.72 ml 1M Mg²⁺溶液

合起来是1000 ml，dextrose就是葡萄糖是1.982g.

最后想说的是，希望大家能多交流，心得能和更多的人分享。我看到了太多藏着掖着不愿意告诉别人的人了，总觉得很遗憾。如果每人知道一点却不愿意说只能是所有人都低水平徘徊。只有多交流才能共同促进，共同提高。

记录的时候是灌流液，写错了，sorry

论坛就是需要你这样的活跃分子。

[em17][em17][em17]

好帖子，我是刚开始做脑片，有好多问题请教啊

感谢楼主的分享！顶了再看。