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传统PCR 扩增Vs .基因合成,您选择谁?

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jinsitebiotech 发表于 2008-8-13 15:14:00 | 显示全部楼层 |阅读模式

 

目前,科研工作者在获取基因序列是最为常用的方法是从cDNA文库或组织细胞cDNA中通过PCR扩增获取有用的DNA片段,不过,传统的cDNA文库PCR扩增也有着以下明显的缺陷:首先,由于cDNA文库一般是由某类或某几类组织制备的,其基因表达有一定的组织特异性,很多基因的表达丰度也相当低,不易钓取,对于这部分基因,即使不算组织获取和cDNA文库建立的成本,一些基因钓取的成本也远远高于全长合成的成本。其次,即使成功获得PCR产物,产物中也经常含有突变位点或单核苷酸多态性(SNP),这样的产物在表达和后续试验方面都可能遇到意想不到的问题。

相对cDNA出发的目标基因扩增方法,全基因合成则并不存在以上问题。由于序列可以根据客户的需要任意定制合成,不会受到目标模板过低、自然存在序列多态 性的影响。同时还可以在序列设计时根据实验目的引入合适密码子偏好,甚至人为引入目标突变位点,或合成自然界中根本不存在的序列以方便研究推进。

 

在获取以下类型的基因时,全基因合成比传统PCR扩增更有优势

 

· 组织样本不易获得,但序列已知的基因

·需要特定突变,使用一般的突变技术无法实现的基因   

·采用传统钓取法时间过长,影响实验进程的基因   

·序列保真度要求高,无突变或SNP存在的基因   

·需要进行密码子优化,以提高外源表达水平的基因  

 ·cDNA文库中不表达,或表达丰度极低,不易PCR获取或获取费用较高的基因

 

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[此贴子已经被作者于2008-9-3 10:43:13编辑过]
沙漏 发表于 2008-9-3 16:09:00 | 显示全部楼层

[em17]

用过这个公司的产品,很不错呢!顶!!!!!!

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