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β淀粉样蛋白(βAmyloid)ELISA检测样本前处理方法
样品前处理
◆脑组织
1.  聚集的Aβ（阿滋海默症病人的脑组织）
①1g脑组织切碎后加5倍体积的TBS，用均质器均质（10次）。 组织匀浆500000×g，4℃离心20分钟。
TBS：50 mmol/L Tris­HCl ,  pH 7.6, 150 mmol/L NaCl ,  蛋白酶抑制剂 [0.1 mmol/L 二异丙基氟磷酸盐 , 0.5 mmol/L 苯甲磺酰氟 , 1 g/mL甲苯磺酰-L-赖氨酸氯甲基酮盐酸盐, 1 g/mL抗痛素, 0.1 g/mL亮肽素]
②沉淀物悬浮与5倍体积的TBA/蛋白酶抑制剂（含1 mol/L蔗糖），500000×g，4℃离心20分钟。
③沉淀物中加入3倍体积的1％Triton X­100/TBS/蛋白酶抑制剂，匀质（10次）。37℃孵育15分钟后，500000×g离心20分钟。
④沉淀物和匀质物中加入3倍体积的2％SDS/TBS/蛋白酶抑制剂到。组织匀浆37℃孵育15分钟后，500000×g 25℃离心。
⑤沉淀物中加1mL 70％蚁酸到，超声破碎后500000×g 4℃离心
⑥收集上清液并用离心浓缩(Speed Vac)干燥。加100μL DMSO并短时超声破碎成悬液。零下80℃储存这个DMSO－蚁酸溶解的Aβ溶液直到使用。
⑦检测时，依照说明书所写，用试剂盒中的标准稀释液溶解样本。推荐稀释度是Aβ40稀释1,000倍，Aβ42稀释100倍。
2. 可溶Aβ（正常脑组织）
2-1. 使用70％蚁酸
①150mg组织加入1mL 70％蚁酸中匀质(敲6次)后100,000×g离心1小时。
②用1 mol/L Tris二十倍稀释上清液
③用试剂盒中的标准稀释液稀释样品后，按照说明书所述方法检测。
2-2. 使用5.0 mol/L盐酸胍
①组织加入10倍体积预冷的L盐酸胍溶液（5.0 mol/L / 50 mmol/L Tris­Cl, pH8.0）后匀质，室温下3～4小时。
②组织匀浆中加入10倍体积的预冷酪蛋白缓冲剂（0.25%干酪素/  0.05% 叠氮化钠/ 20μg/ml抑肽酶/ 5 mmol/l EDTA, pH8.0 / 10μg/mL亮肽素，溶于PBS），16,000×g，4℃离心20分钟。
③用试剂盒中的标准稀释液稀释上清液后，按照说明书所述方法检测。
◆细胞培养上清液
根据需要用试剂盒中的标准稀释液稀释样品，然后按照说明书所述方法检测。推荐稀释浓度是Aβ40稀释5倍，Aβ42无需稀释。
◆ 脑脊液
根据需要用试剂盒中的标准稀释液稀释样品，然后按照说明书所述方法检测。推荐稀释浓度是50倍。
◆ 血浆
①用EDTA2K离心收集在真空血液收集管中的血液，5,000×g，15分钟，4℃，分离血浆样品，然后储存在零下80℃直到使用。
②用试剂盒中的标准稀释液4倍稀释血浆以避免血浆中的干扰物质影响检测，按照说明书指定方法检测。

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c沉淀物中加入3倍体积的1％Triton X­100/TBS/蛋白酶抑制剂，匀质（10次）。37℃孵育15分钟后，500000×g离心20分钟。④沉淀物和匀质物中加入3倍体积的2％SDS/TBS/蛋白酶抑制剂到。组织匀浆37℃孵育15分钟后，500000×g 25℃离心。

d沉淀物中加1mL 70％蚁酸到，超声破碎后500000×g 4℃离心

e收集上清液并用离心浓缩(Speed Vac)干燥。加100μL DMSO并短时超声破碎成悬液。零下80℃储存这个DMSO－蚁酸溶解的Aβ溶液直到使用

f检测时，依照试剂盒要求，使用标准稀释液溶解样本.。

2. 可溶Aβ(正常脑组织)

2-1. 使用70％蚁酸

①150mg组织加入1mL 70％蚁酸中匀质(敲6次)后100,000×g离心1小时。

②用1 mol/L Tris二十倍稀释上清液

③用试剂盒中的标准稀释液稀释样品后，按照说明书所述方法检测。

2-2. 使用5.0 mol/L盐酸胍

①组织加入10倍体积预冷的L盐酸胍溶液（5.0 mol/L / 50 mmol/L Tris­Cl, pH8.0）后匀质，室温下3～4小时。

②组织匀浆中加入10倍体积的预冷酪蛋白缓冲剂（0.25%干酪素/  0.05% 叠氮化钠/ 20μg/ml抑肽酶/ 5 mmol/l EDTA, pH8.0 / 10μg/mL亮肽素，溶于PBS），16,000×g，4℃离心20分钟。

③用试剂盒中的标准稀释液稀释上清液后，按照说明书所述方法检测。

◆细胞培养上清液

根据需要用试剂盒中的标准稀释液稀释样品，然后按照说明书所述方法检测。Aβ40浓度是Aβ42的5倍。

◆     脑脊液

根据需要用试剂盒中的标准稀释液稀释样品，然后按照说明书所述方法检测。按试剂盒要求稀释。

◆     血浆

①用EDTA2K离心收集在真空血液收集管中的血液，5,000×g，15分钟，4℃，分离血浆样品，然后储存在零下80℃直到使用。

②用试剂盒中的标准稀释液稀释血浆以避免血浆中的干扰物质影响检测，按照说明书指定方法检测。