生化常用试剂溶液的配制

一、常用试剂的配制


1、0.5mol/L氢氧化钠溶液
□组份浓度 0.5mol/L
□配制量      2L
□配制方法
1.准确称取氢氧化钠40g。
2.用去离子水溶解并稀释至2L。
2、0.5mol/L盐酸溶液
□组份浓度   0.5mol/L
□配制量       2L
□配制方法
1.准确量取盐酸83.4mL。
2.用去离子水稀释至2L。
3、含 0.5mol/L氯化钠的
□组份浓度 0.5mol/L氯化钠、0.5mol/L氢氧化钠
     0.5mol/L氢氧化钠溶液   
□配制量 1L
□配制方法
1.准确量取氯化钠29.3g。
2.准确量取氢氧化钠20g。
3.用去离子水稀释至1L。
注意：此溶液供回收纤维素时使用。
4、0.2％葡萄糖标准溶液
□组份浓度 0.2％
□配制量 1L
□配制方法
1.称取葡萄糖2.5g置于称量瓶中，在70℃干燥2小时。
2.干燥器中冷却至室温，重复干燥，冷却至恒重。
3.准确称取葡萄糖2.000g。
4.用去离子水溶解并定容至1L
5.于4℃保存。
5、250μg/mL牛血清白蛋白标准液            
□组份浓度 250μg/mL
□配制量 2L
□配制方法 1.准确称取250mg标准牛血清白蛋白。
2.用0.03mol/LpH7.8的磷酸缓冲液溶解并定容至1L。
3.4℃保存。
6、Folin试剂甲                     
□配制方法
1.称取10g氢氧化钠溶于400mL去离子水中， 加入50g无水碳酸钠，溶解，待用。                                                                        
2.称取0.5g酒石酸钾钠，溶于80mL去离子水中， 加入0.25g硫酸铜?5水，溶解。
3.将1：2：去离子水按20：4：1的比例混合即可。
4. 4℃保存，可用一周。
7、Folin试剂乙
□配制方法
1.在500mL的磨口回流装置内加入钨酸钠?2水25.0359g， 钼酸钠?2水6.2526g，去离子水175mL，85％磷酸12.5mL，  浓盐酸25mL，充分混合。
2.回流10小时，再加硫酸锂37.5g，去离子水12.5mL
及数滴溴。
3.然后开口沸腾15min，以驱除过量的溴，冷却后定容到250mL。
4.于棕色瓶中保存，可使用多年。
　　注意：上述制备的Folin试剂乙地贮备液浓度一般在2mol/L左右，几种操作方案都是把Folin试剂乙稀释至1mol/L的 浓度作为应用液，此处是把贮备液于使用前稀释18 倍，使之浓度为0.1mol/L略高。这种稀释18倍后的Folin 试剂乙就是上文称之为的“应用液”。Folin试剂乙贮备 液浓度的标定，一般是以酚酞为指示剂。用Folin试剂乙去滴定1mol/L左右的标准氢氧化钠溶液，当溶液颜色由红变为紫灰，再突然变成墨绿即为终点，如果用氢氧化钠去滴定Folin试剂乙，终点不太好掌握，溶液地颜色是由浅黄变为浅绿，再变为灰紫色为终点。
8、DNS试剂（3，5-二硝基水杨酸试剂）
□配制方法
1.取3，5-二硝基水杨酸10g,加入2mol/L氢氧化钠溶液200mL。
2.将3，5-二硝基水杨酸溶解，然后加入酒石酸钾钠300g。   
3. 待其完全溶解，用去离子水稀释至2000mL，棕色瓶保存。
9、5％蔗糖溶液                  □组份浓度 5％
                                               □配制量 1L
                                               □配制方法 称取蔗糖50g，用去离子水溶解定容至1L。
10、0.1mol/L蔗糖溶液     □组份浓度 0.1mol/L
                                               □配制量 1L
                                               □配制方法 称取蔗糖34.230g，用去离子水溶解并定容至1L。
11、20％乙酸溶液             □组份浓度 20％
                                              □配制量 1.2L
                                              □配制方法 量取冰乙酸300mL，用去离子水稀释至1200mL。
12、30％（W/V）Acrylamide    □组份浓度 30％（W/V）Acrylamide 0.05％
                                                         □配制量 1L
                                                         □配制方法 1.称量下列试剂，置于1L烧杯中
                                                                                       Acrylamide   290g
                                                                                       BIS                   10g
                                                                               2.向烧杯中加入约600mL的去离子水，充分
搅拌溶解
                                                                               3.加入去离子水将溶液定容至1L，用0.45μm
滤膜滤去杂质。
                                                                              4.于棕色瓶中4℃保存。
注意：丙烯酰胺具有很强的神经毒性，并可通过皮肤吸收，其作用有积累性，配制时应戴手套等。聚丙烯酰胺无毒，但也应谨慎操作，因为有可能含有少量的未聚合成份。


13、40％（W/V）Acrylamide     □组份浓度 40％（W/V）Acrylamide 0.05％
                                                         □配制量 1L
                                                         □配制方法 1.称量下列试剂，置于1L烧杯中
                                                                                       Acrylamide     380g
                                                                                       BIS                     20g
                                                                               2.向烧杯中加入约600mL的去离子水，充分                  
搅拌溶解
                                                                               3.加入去离子水将溶液定容至1L，用0.45μm
滤膜滤去杂质。
                                                                               4.于棕色瓶中4℃保存。
注意：丙烯酰胺具有很强的神经毒性，并可通过皮肤吸收，其作用有积累性，配制时应戴手套等。聚丙烯酰胺无毒，但也应谨慎操作，因为有可能含有少量的未聚合成份。


14、10％（W/V）过硫酸铵         □组份浓度 10％（W/V）过硫酸铵
                                                         □配制量      10mL
                                                         □配制方法 1.称取1g过硫酸铵。
                                                                               2.加入10mL的去离子水后搅拌溶解。
                                                                               3.贮存于4℃。
注意：10％过硫酸胺溶液在4℃保存时间可使用2周左右，超过期限会失去催化作用。


15、考马斯亮蓝R-250染色液 □组份浓度 0.1％（W/V）考马斯亮蓝R-250，25%（V/V）
异丙醇，
                                                                            10％（V/V）冰醋酸
                                                      □配制量      1L
                                                      □配制方法 1.称取1g考马斯亮蓝R-250,置于1L烧杯中。
                                                                           2.量取250mL的异丙醇加入上述烧杯中，搅拌
溶解。
                                                                           3.加入100mL的冰乙醋酸，均匀搅拌。
                                                                           4.加入650mL的去离子水，均匀搅拌。
                                                                           5.用滤纸出去颗粒物质后，室温保存。
16、考马斯亮蓝染色脱色液     □组份浓度 10％（V/V）醋酸，5％（V/V）乙醇
                                                      □配制量 1L
                                                      □配制方法 1.量取下列溶液，置于1L烧杯中。
                                                                                    醋酸     100mL
                                                                                    乙醇        50mL
                                                                                   dH2O     850mL
                                                                             2.充分混合后使用。
17、凝胶固定液                         □组份浓度 50％（V/V）甲醇，10％（V/V）醋酸
(SDS-PAGE银氨染色用)           □配制量 100L
                                                      □配制方法 1.量取下列溶液，置于1L烧杯中。
                                                                                   甲醇   500mL
                                                                                   醋酸  100mL
                                                                                  dH2O  400mL
                                                                            2.均匀混合后室温保存。
18、凝胶处理液                        □组份浓度 50％（V/V）甲醇，10％（V/V）戊二醛
(SDS-PAGE银氨染色用)          □配制量 1L
                                                     □配制方法 1.量取下列溶液，置于1L烧杯中。
                                                                                    甲醇       50mL
                                                                                    戊二醛   10mL
                                                                                    dH2O     40mL
                                                                           2. 均匀混合后室温保存。
19、凝胶染色液                       □组份浓度   0.4％（W/V）硝酸银，1％（V/V）浓氨水， (SDS-PAGE银氨染色用)                 0.04％（W/V）氢氧化钠
                                                     □配制量      100L
                                                     □配制方法 1.量取下列试剂，加入100～200mL试剂瓶中。
                                                                                   20％硝酸银 2mL
                                                                                            浓氨水 1mL
                                                                                  4％氢氧化钠 1mL
                                                                                              dH2O 96mL
                                                                           2.均匀混合。该溶液应为无色透明状。如氨水浓
度过低时溶液 会呈现混浊状，此时应补加浓氨
水，直至透明。
                                                                            3.本染色液应现用现配，不宜保存。
20、显影液                                □组份浓度 0.005％（V/V）柠檬酸，0.02％（V/V）甲醛
(SDS-PAGE银氨染色用)           □配制量 1L
                                                      □配制方法 1.称取下列试剂，置于1L试剂瓶中。
                                                                                       柠檬酸 50mg
                                                                                           甲醛 0.2mL
                                                                            2.加入1L去离子水后，摇动混合后溶解。
                                                                           3.室温保存。
21、45％乙醇溶液                  □组份浓度 45％
                                                    □配制量 1L
                                                    □配制方法  量取无水乙醇450mL，加入去离子水550mL，混
匀。
22、5％的十二烷基硫酸钠溶液  □组份浓度 5％
       （W/V）                                   □配制量 0.1L
                                                         □配制方法 称取5.0g十二烷基硫酸钠，溶于100mL4％的
乙醇溶液中。
23、三氯甲烷-异戊醇混合试剂   □配制方法 取500mL三氯甲烷试剂，加入21mL异戊醇
试剂，混匀。
24、1.6％乙醛溶液                     □组份浓度 1.6％
                                                       □配制量 0.1L
                                                       □配制方法 取47％乙醛3.4mL，用去离子水定容至100mL。
25、二苯胺试剂                         □配制方法 1.称取二苯胺试剂0.8g，溶解于180mL冰乙酸中，
                                                                             2.再加入8mL高氯酸混匀。
                                                                             3. 临用前加入0.8mL 1.6％乙醛溶液。
注意：配制完成后试剂应为无色。

26、15％三氯乙酸溶液              □组份浓度 15％
                                                       □配制量         2L
                                                       □配制方法 称取三氯乙酸300g，用去离子水溶解定容至
2000mL。
27、1％谷氨酸溶液                   □组份浓度 1％
                                                       □配制量      0.5L
                                                       □配制方法 1.称取5g谷氨酸，先用适量得用去离子水溶解。
                                                                             2. 再用氢氧化钾溶液中和至中性。
                                                                             3. 最后用去离子水定容至0.5L。
28、1％丙酮酸溶液                    □组份浓度     1％
                                                       □配制量      0.5L
                                                       □配制方法 1.称取5g丙氨酸，先用适量得用去离子水溶解。
                                                                             2. 再用氢氧化钾溶液中和至中性。
                                                                             3. 最后用去离子水定容至0.5L。
29、0.1％的碳酸氢钾溶液       □组份浓度 0.1％
                                                     □配制量      0.5L
                                                     □配制方法 称取碳酸氢钾0.5g，用去离子水溶解定容至0.5L。
30、0.05％的碘乙酸溶液       □组份浓度 0.05％
                                                    □配制量 0.25L
                                                    □配制方法   称取0.125g碘乙酸，用去离子水溶解定容至
0.25L。
31、Locke氏溶液                    □配制量 2L
                                                    □配制方法 称取18g氯化钠，0.84g氯化钾，0.48g氯化钙，  
0.3g碳酸氢钠，2g葡萄糖，用去离子水溶解定容
至2000mL。
32、0.2mol/L的丁酸溶液      □组份浓度 0.2mol/L
                                                   □配制量 1L
                                                   □配制方法 1.量取18mL正丁酸试剂。
                                                                         2.用1mol/L的氢氧化钠中和。
                                                                         3.再用去离子水定容至1L。
33、0.1mol/L的硫代硫酸钠溶液 □组份浓度 0.1mol/L
                                                           □配制量      10L
                                                           □配制方法 称248.17g硫代硫酸钠，用去离子水溶解并定
容至10L。
34、0.1mol/L的碘溶液          □组份浓度 0.1mol/L
                                                   □配制量 1L
                                                   □配制方法 1.称取碘12.7g和碘化钾25g。
                                                                         2.用去离子水溶解并定容至1L。
                                                                         3.用0.1mol/L的硫代硫酸钠标定。
35、10％氢氧化钠溶液           □组份浓度 10％
                                                    □配制量 2L
                                                    □配制方法 称取200g氢氧化钠，用去离子水溶解并定容至
2L。
36、10％盐酸溶液                  □组份浓度 10％
                                                   □配制量 0.2L
                                                   □配制方法 量取浓盐酸49.3mL，用去离子水定至0.2mL。
37、0.1％标准丙氨酸溶液      □组份浓度 0.1％
                                                    □配制量 0.5L
                                                    □配制方法 称取丙氨酸0.5g，用去离子水溶解并定容至
0.5mL。
38、0.1％标准谷氨酸溶液      □组份浓度 0.1％
                                                    □配制量     0.5L
                                                    □配制方法 称取谷氨酸0.5g，用去离子水溶解并定容至
500mL。
39、0.1％水合茚三酮乙醇溶液 □组份浓度 0.1％
                                                         □配制量         1L
                                                         □配制方法 称取1g水合茚三酮试剂，溶于1000mL无水乙
醇中。
40、酚溶液                                    □配制方法 在大烧杯中加入80mL去离子水，再加入300g 苯酚，在水 浴中加热搅拌、混合至苯酚完全溶解。将该溶液倒入盛有200mL去离子水的1000mL分液漏斗内，轻轻振荡混合，使其成为乳状液。静止7～10小时，乳状液变成两层透明溶液，下层为被水饱和的酚溶液，放出下层，贮存于棕色瓶中备用。


41、0.5％淀粉溶液                      □组份浓度 0.5％
                                                         □配制量    0.1L
                                                         □配制方法 称取淀粉0.5g，用去离子水溶解定容至0.1L。


42、对羟基联苯试剂                    □配制方法 称取对羟基联苯1.5g，溶于100mL0.5％氢氧化钠溶液中，配制成1.5％的溶液。若对羟基联苯颜色较深，应用丙酮或无水乙醇重结晶，放置时间较长后，会出项针状结晶，应摇匀后使用。


二、常用缓冲液的配制

1、0.2 mol/L 磷酸缓冲液      □组份浓度 0.2mol/L
     （pH 6.0）                           □配制量 1L
                                                    □配制方法 1. 称取磷酸氢二钠?12水 8.82 g。
                                                                         2. 称取磷酸二氢钠?2水 27.34g。
                                                                         3. 用去离子水溶解并定容至1L。室温保存。
                                                                         注意：此为母液，使用时稀释40倍使用。

2、洗脱液                                 □组份浓度 0.15mol/L
     （含0.15mol/L氯                □配制量       10L
     化钠的0.005mol/L              □配制方法 1.称取氯化钠87.66g。
     pH 6.0的磷酸缓冲液）                          2. 用0.2mol/L pH6.0的磷酸缓冲液250mL溶解。
                                                                         3. 用去离子水稀释至10 L。室温保存。   
3、0.3mol/L磷酸缓冲液        □组份浓度 0.3mol/L
      （pH7.8）                           □配制量       0.5L
                                                     □配制方法 1.准确称取磷酸氢二钠?12水49.150g。
                                                                           2.磷酸二氢钠?2水2.000g。
                                                                           3. 用去离子水溶解并定容至0.5L。室温保存。
       注意：此为母液，使用时稀释10倍使用。

4、0.2mol/L乙酸缓冲液        □组份浓度 0.2mol/L
      （pH4.6）                           □配制量       2L
                                                     □配制方法 1.准确称取乙酸钠?3水54.44g。
                                                                          2. 加入23mL冰乙酸，溶解。
                                                                          3. 用去离子水溶解并定容至2L。4℃保存。
5、0.2mol/L磷酸-柠檬酸       □组份浓度 0.2mol/L
缓冲液（pH 2.6、4.6、6.6）    □配制量     各1L
                                □配制方法  1. 母液A（0.2mol/L的Na2HPO4溶液）：称取
Na2HPO4?12水143.256g，用去离子水定容至2L。
                                                                          2. 母液B（0.1mol/L的柠檬酸溶液）：称取柠
檬酸?1水42.028g用去离子水溶解定容至2L。
                                                                          3. pH2.6、4.6、6.6的三种缓冲液如下表配制：
                                                                              pH值 A（mL） B（mL）
                                                                               2.6     109.0        891.0
                                                                               4.6      467.5       532.5
                                                                               6.6       727.5      272.5
                                                                          4. 按上表混匀后，4℃保存。
6、20×SSC 缓冲液             □配制量      1L
      （pH7.0）                      □配制方法  1.准确称取175.2g氯化钠。
                                                                      2.准确称取88.2g柠檬酸钠?2水。
                                                                      3.溶解于800mL去离子水中。
                                                                      4.加入数滴10mol/L氢氧化钠溶液调节pH值至7.0。
                                                                      5.加去离子水定容至1L。
注意：按实验需要可分装后高压灭菌。10×SSC、5×SSC、1×SSC可由20×SSC做相应稀释得到。

7、0.15mol/L氯化钠-                 □组份浓度    0.15mol/L
      乙二胺四乙酸二钠                □配制量       1L
      缓冲液                                      □配制方法   1.准确称取氯化钠8.77g。
     （pH8.0）                                                      2. 称取乙二胺四乙酸二钠37.2g。
                                                                             3. 溶于800mL去离子水中。
                                                                             4.用固体的氢氧化钠调pH值为8.0。
                                                                              5.加去离子水定容至1L。
8、1/15mol/L的磷酸盐             □组份浓度 0.15mol/L
  缓冲液（pH7.6）                      □配制量      1L
                                             □配制方法 1.溶液甲（1/15mol/L的KH2PO4溶液）：称取
KH2PO4  9.078g，用去离子水溶解定容至1L。
                                                                            2. 溶液乙（1/15mol/L的Na2HPO4溶液）：称取
Na2HPO4? 2水11.876g（或磷酸氢二钠?12水
23.894g）用去离子水溶解定容至1L。
                                                                           3.pH7.6磷酸盐缓冲液：将①和②按1.4：8.6比
例混合即可。
9、5×Tris-GlycineBuffer           □组份浓度 0.125M Tris，1.25M Glycine，0.5％（w/v）SDS。
（SDS-PAGE电泳缓冲液）      □配制量       1L
                                                        □配制方法 1.称取下列试剂，置于1L烧杯中。
                                                                                   Tris           15.1g
                                                                                   Glycine        94g
                                                                                   SDS            5.0g
                                                                               2.加入约800mL的去离子水，搅拌溶解。
                                                                               3.加去离子水将溶液定容至1L后，室温保存。
10、5×SDS-PAGE                     □组份浓度 250mM Tris-HCl（pH6.8）
        Loading Buffer                                            10％（W/V）  SDS
                                                                               0.5％（W/V） BPB
                                                                                 50％（V/V） 甘油
                                                                                   5％（W/V） β-巯基乙醇
                                                      □配制量         5mL
                                                      □配制方法 1.量取下列试剂，置于10mL塑料离心管中。
                                                                                1M Tris-HCl 1.25mL
                                                                                SDS 0.5g
                                                                                BPB 25mg
                                                                                甘油 2.5mL
                                                                           2.加入去离子水溶解后定容至5mL。
                                                                           3.小份（500μl/份）分装后，于室温保存。
                                                                            4.使用前将25μl的2-ME加到每小份中。
                                                                           5.加入2-ME的Loading Buffer可在室温下保
存一个月左右。

生化仪是临床检验中经常使用的重要分析仪器之一它通过对血液或者其他体液的分析来测定各种生化指标：如转氨酶、血红蛋白、白蛋白、总蛋白、胆固醇、肌肝、葡萄糖、无机磷、淀粉酶、钙等。结合其他临床资料，进行综合分析，可以帮助诊断疾病，对器官功能做出评价，鉴别并发因子，以及决定今后治疗的基准等。本类仪器经过三代发展，由第一代：分光光度计，第二代：半自动生化分析仪到第三代：全自动分析仪，第三代全自动分析仪已发展成熟，广泛应用于医疗机构。