如何确定RNA质量

如何确定RNA质量
1） 检测 RNA 溶液的吸光度
280、320、230、260nm下的吸光度分别代表了核酸、背景（溶液浑浊度）、盐浓度和蛋
白等有机物的值。一般的，我们只看OD260/OD280（Ratio，R）。1.82.0 时，我们认为RNA
中蛋白或者时其他有机物的污染是可以容忍的，不过要注意，当你用Tris作为缓冲液检测吸
光度时，R值可能会大于 2（一般应该是<2.2 的）。当R<1.8 时，溶液中蛋白或者时其他有机
物的污染比较明显，你可以根据自己的需要决定这份RNA的命运。当R>2.2 时，说明RNA
已经水解成单核酸了。
2）RNA的电泳图谱
一般的，RNA的电泳都是用变性胶进行的，但是根据我的经验，如果你仅仅是为了检
测RNA的质量是没有必要进行如此麻烦的实验的，用普通的琼脂糖胶就可以了。
电泳的目的是在于检测 28S和 18S条带的完整性和他们的比值，或者是mRNA smear的
完整性。一般的，如果 28S和 18S条带明亮、清晰、条带锐利（指条带的边缘清晰），并且
28S的亮度在 18S条带的两倍以上，我们认为RNA的质量是好。
以上是我们常用的两种方法，但是这两种方法都无法明确的告诉我们RNA溶液中有没
有残留的RNA酶。如果溶液中有非常微量的RNA酶，用以上方法我们很难察觉，但是大部
分后续的酶学反应都是在 37 度以上并且是长时间进行的。这样，如果RNA溶液中有非常微
量的RNA酶，那么在后续的实验中就会有非常适合的环境和时间发挥它们的作用了，当然
这时你的实验也就完了。
下面，我们介绍一个可以确认RNA溶液中有没有残留的RNA酶的方法。
3）保温试验
方法很简单的，按照样品浓度，从RNA溶液中吸取两份 1000 ng的RNA加入至 0.5 ml的
离心管中,并且用pH7.0 的Tris缓冲液补充到 10 ul的总体积，然后密闭管盖。把其中一份放入
70℃的恒温水浴中,保温 1 h。另一份放置在-20℃冰箱中保存 1 h。
时间到了之后，取出两份样本进行电泳。电泳完成后，比较两者的电泳条带。如果两者
的条带一致或者无明显差别（当然，它们的条带也要符合方法 2 中的条件），则说明RNA溶
液中没有残留的RNA酶污染，RNA的质量很好。相反的，如果 70℃保温的样本有明显的降
解，则说明RNA溶液中有RNA酶污染。