抗淋巴细胞药Cyclosporin A的生物性质研究

Cyclosporin A 是一种抗淋巴细胞药，竞争性结合且抑制calcineurin。
        体外研究：在T细胞中，Cyclosporin A与亲环蛋白(免疫亲和素)结合，形成亲环蛋白-Cyclosporin A复合体，其结合并抑制钙调磷酸酶。Cyclosporin A 抑制钙调磷酸酶，IC50 是7 nM，随后阻断NF-AT核转运。 Cyclosporin A通过抑制MTP(线粒体通透性转换孔)的开放而影响线粒体，IC50 是39 nM。
体内研究：Cyclosporin A是一种免疫抑制剂，小鼠，大鼠，和荷兰猪经非肠道给药或者口服给药都有效，临床上用于器官移植中预防免疫排斥。
细胞试验:
细胞系：Jurkat细胞(无性繁殖J77)
浓度：~100 nM
处理时间：1小时
        方法：免疫抑制剂以细胞治疗浓度的1000倍溶于乙醇。细胞(106)悬浮于微量离心管1ml完全培养基中；1 μl乙醇或者Cyclosporin A乙醇溶液加入反应液中，细胞在37°C下培育1小时。细胞在冰浴下用1ml PBS洗两次，在50μl低渗缓冲液中裂解，缓冲液每毫升包含50 mM Tris (pH 7.5); 0.1 mM EGTA; 1 mM EDTA; 0.5 mM二硫苏糖醇; 以及50 微克苯甲基磺酰氯，50 微克胰蛋白酶抑制剂，5微克亮抑酶肽，和5 微克抑肽酶。裂解液用液氮冷冻，再在30°C下融化，循环3次，随后在 4°C下以12,000×g离心10分钟。
        原文转自：抗淋巴细胞药Cyclosporin A的生物性质研究