【新锐技术速递】番石榴非洲游记——One Drop Blood微流式应用指南

战友们，
双十一战鼓初歇，钱包瘪瘪，
想想双十二已经隐隐招手，
赶紧收收心，
奔赴bench第一线为“生计”拼搏吧！


咱们生物这一行当属性烧钱，
剁手之后赶紧省钱
SO
今天咱们走台基调“严肃 认真 活泼”
本期主题—— 论“生物与银子的关系”









序曲
31岁，美女，single，女版《乔布斯》伊丽莎白.福尔摩斯创办的血液检测公司Theranos凭借“一滴血业务”获得90亿美金估值，咱们实验君的人生也可以星光璀璨滴！血业务”获得90亿美金估值，咱们实验君的人生也可以星光璀璨滴！


亲们，
还记得咱们流式进化论的主角番石榴儿不！
世界上第一台个人型流式细胞仪Guava，
为太空探索而生！
为啥叫番石榴涅？
不是俺们卖萌，
谁让只有水果才配得上伟大的发明嘞！
（乔布斯君 这厢有礼啦）




一滴血可以造就Theranos财富新神话 且看番石榴一滴血如何造福HIV疫区监测
T细胞微量检测操作指南 —— 深入疫区的HIV分级
Abstract  不为老板省钱的学生不是好学生

流式细胞仪采用独特的微毛细管液流系统摒弃了传统流式细胞仪必须依赖鞘液的流体动力学聚焦原理，最大程度的保护细胞不受到高速鞘液流冲击的影响，同时由于摒弃鞘液，全部细胞均被检测，没有细胞的损失，同样的实验，只需比较少的细胞数量接就可以获得有意义的细胞分群数据，节省样本以及检测试剂用量。
Keywords : 微样本、微学习、省钱、爱护脑细胞、关爱老板！

深入疫区的HIV分级 CD4+ T细胞绝对数量是用来监控HIV/AIDS病人疾病级数的指标，能够判定何时应该开始接受抗逆转录病毒药物治疗，并能够检测病人对于治疗的反应情况。俺们的番石榴曾经担负世卫组织重任，深入非洲疫区，现场检测HIV，仅需10微升血样（10 10 10 微升哦 ）即可得到准确可靠的检测结果，你造嘛 对于非洲人民，介个不是事儿，keypoint 仅需1.25美金，严肃而论，挽救了很多非洲无辜儿童。



T淋巴细胞亚群检测  T淋巴细胞表面有特异性标志，如CD1+细胞是早期胸腺细胞，CD2+细胞是有绵羊红细胞受体的T细胞(E+T细胞)，CD3+细胞代表总T细胞，CD4+细胞代表T辅助细胞(TH)， CD8+细胞是杀伤性T细胞（Tc或CTL）或抑制性T细胞（Ts）等。根据不同的表面标志物可以对T细胞进行分群，其中CD3+/CD4+为辅助性T细胞，CD3+/CD8+为杀伤性T细胞。

T淋巴细胞亚群在许多临床疾病中可发生异常改变，特别是免疫功能受损的病人。测定T淋巴细胞亚群变化对了解疾病的发病机制、指导临床治疗、控制疾病的发生发展均有重要意义。
1、在自身免疫病中，如SLE、RA、自身免疫性溶血性贫血，以及乙型肝炎病人常表现为CD8+细胞的数量及功能低下，有时也有CD4+细胞增高，因此CD4+/CD8+比值升高。
2、细胞免疫缺陷病患者CD4+/CD8+比值减低，如获得性免疫缺陷综合症（AIDS）患者，CD4+显著减少，常出现CD4+/CD8+比值倒置。此项指标现常用于HIV感染者的监测。
3、病毒感染时，总T细胞、CD4+细胞减少，CD8+细胞增多，CD4+/CD8+比值降低。
4、肿瘤病人总T细胞，CD4+细胞明显减少，CD8+明显增加，CD4+/C8+比值明显下降。据此，可了解患者的免疫状态以指导免疫调节剂及治疗药物的应用。
5、血液系统疾病T细胞亚群也有相应变化，如再生障碍性贫血、粒细胞减少症时CD4+细胞减少，CD8+细胞增多，CD4+/C8+比值下降。


Methods:
使用流式细胞仪和荧光标记抗体，可以对人全血标本中T细胞CD3/CD4进行分群和绝对计数。
一、实验材料
1. 仪器：番石榴
2. 标本：肝素或者EDTA-K3抗凝全血
3. 试剂： Human CD3/CD4/CD8 抗体
4. 96-well微孔板
二、实验步骤
1. 样本准备
采用静脉采血方式，将全血样本置于肝素或者EDTA-K3抗凝管中；为了保证实验结果，确保在样本收集后30h内完成实验。
  
2. 样本染色
1) 在96孔板中加入10ul CD8-FITC/CD4-PE/CD3-PECY5 预混试剂；或者根据抗体说明书加入相应体积抗体
2) 在每孔中加入10ul抗凝全血（约1×105细胞）；
3) 用枪头上下吹打混匀试剂和全血（确保没有血样粘附在孔壁上影响实验结果）；
4) 室温（18-25℃）避光孵育20min；
5) 每孔中加入180ul 1X Lysing Solution或相应体积的裂解试剂；
6) 立即用枪头上下吹打混匀每孔；
7) 室温（18-25℃）避光孵育15min；
8) 用流式细胞仪获取结果（最好3h内进行检测）


Results
无鞘液流式可以精确计算上样体积与样品浓度，10微升血样获得T细胞分型结果 。




小剧场

双十一等抢购的时候无聊翻起一本旧小说，描写大龄生物女博士的凄美爱情故事，赫然发现里面一句话“她管流式细胞检测仪，程序复杂，很少有人来用.......” 瞬间有膜拜的冲动，这潜台词不是在给俺们操作简单、维护简单、高开机率的番石榴戴小红花嘛！

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