Western blot 试剂准备
Western Blot试剂的准备1. 30%储备胶溶液：
丙烯酰胺（Acr） 29.0g
亚甲双丙烯酰胺（Bis） 1.0g
混匀后ddH2O，37℃溶解，定容至100ml，棕色瓶存于室温。
2. 4×分离胶缓冲液（1mol/L Tris-HClPH 8.8） Tris18.17g加ddH2O溶解，浓盐酸调PH 8.8，定容至100ml。
3. 4×浓缩胶缓冲液（0.5mol/L Tris-HClPH 6. 8） Tris12.1g加ddH2O溶解，浓盐酸调PH 6. 8，定容至100ml。
4. 10%SDS：电泳级SDS 10.0g加ddH2O，68℃助溶，浓盐酸调PH 7.2，定容至100ml。
5. 5×电泳缓冲液（PH 8.3）： Tris 15.2g
甘氨酸 94g
ddH2O 定容到1000ml
SDS 5g
先在974ml蒸馏水中加入Tris碱，待溶解完全后，再加甘氨酸，最后加SDS。
6. 10%过硫酸铵（AP）：0.1gAP加ddH2O至1.0ml，4℃保存，要在一周内使用，最好新鲜配制。
7. 2×加样缓冲液：2×SDS加样缓冲液
0.5mol/L Tris-HCl (PH 6.8)2ml
10%SDS 4 ml
β-巯基乙醇 1ml
甘油 2ml
1%溴芬蓝 1ml
置4℃避光保存
8. TEMED：注意室温较低时TEMED量可加倍，最后灌胶之前再用
9. 转膜缓冲液(Towbin transfer Buffer)：
即1×SDS-PAGE
10. 0.0 1mol/L PBS (PH 7.4) ： NaCl 8.5g
(12H2O)Na2HPO4 2.9011g
(2H2O)NH2PO4 0.24g
加ddH2O定容至 1000ml
11. 封闭液: 1×PBS中加入 30ml
5%（V/V）脱脂奶粉 1.5g
0.02%叠氮钠 0.006g
0.05%Tween-20 0.015g
12. 漂洗液（PBST）：含0.05% Tween-20的PBS溶液
每1000 ml PBS溶液中加0.5 ml Tween-20
13. 水饱和正丁醇：
正丁醇 50 ml
ddH2O 5 ml 加入瓶中震荡，使结合，存于室温。
用时取上面一相加在凝胶上面。
14. 考马斯亮蓝染色法试剂：一般用G250考马斯亮蓝（蛋白定量专用）
染色液： 90 ml甲醇：水（1：1，V/V）和10 ml冰乙酸的混合液中溶解G250马斯亮蓝0.25g，用Whatman 1号滤纸过滤染液以去除颗粒状物质。（染色液多次回收利用）
脱色液：90 ml甲醇：水（1：1，V/V）和10 ml冰乙酸的混合液
15. 丽春红S染色色法试剂：2%乙酸，
0.5%丽春红的水溶液
脱色液：TBS
16. Aprotinin:为一58氨基碱性多肽，经反复冻融后，会发生集聚，储存液应分装成小份，保存于-20度，每一小份用后应予废弃。
17. PMSF：在溶液中不稳定，应在临用前从储存液中现加于裂解液中。一旦眼睛或皮肤接触了PMSF，应立即用大量的水冲洗。凡被PMSF污染的衣物应予丢弃。PMSF通常配成10mmol/L浓度储液（1.74或17.4mg/ml溶于异丙醇中）保存于-20度。
18. 显色液：联苯胺显色液（DAB）
DAB 2ml
10%H2O2 60μl
PBS(0.1mol/L PH6.4) 10ml
19. 三去污裂解缓冲液
0.5mol/L Tris-HCl(PH 8.0) 0.785g/100ml
0.15mol/LNaCl 0.8775 g/100ml
0.02%叠氮钠 0.02 g/100ml
0.1%SDS 0.1 g/100ml
超级详细配方：
SDS-PAGE、蛋白转印、Western Blot试剂配制
(***整理，2004.9.6)
1.5 mol/L Tris (PH8.8)
1．称量181.7g Tris置于1L烧杯中。
2．加入约800 ml去离子水，充分搅拌溶解。
3．用浓盐酸调节pH值至8.8。
4．定容至1L.
5．高压灭菌后，室温保存。
注意：应使溶液冷却至室温后再调定pH值，因为Tris溶液的pH值随温度的变化差异很大，温度每升高1oC，溶液的pH值大约降低0.03个单位。
（参照kara公司Catalog-N1）
1 mol/L Tris (PH6.8)
1．称量121.1g Tris置于1L烧杯中。
2．加入约800 ml去离子水，充分搅拌溶解。
3．按下表量加入浓盐酸调节所需的pH值。
pH值
浓HCl
6.8
7.4
约70 ml
7.6
约60 ml
8.0
约42 ml
4．定容至1L.
5．高压灭菌后，室温保存。
注意：1.溶液冷却至室温后再调定pH值，因为Tris溶液的pH值随温度的变化差异很大，温度每升高1oC，溶液的pH值大约降低0.03个单位。2. 如1 mol/L溶液呈现黄色，应予丢弃，并置备质量更好的Tris。 我也想了解，谢谢发帖的人
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