代做实验 RT－PCR实验技术对外服务（威斯腾生物技术）

中国生命科学实验技术服务联盟
威斯腾生物技术服务中心（重庆）
承接RT-PCR，荧光定量PCR，EMSA, WesternBlot，RNAi，慢病毒载体构建，原位末端凋亡，免疫共沉淀，基因合成测序，单克隆抗体制备等一系列实验技术服务，欢迎来电讯洽。
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RT-PCR技术简介:

逆转录-聚合酶链反应 (Reverse Transcription-Polymerase Chain Reaction，RT-PCR)的原理是：提取组织或细胞中的总RNA，以其中的mRNA作为模板，采用Oligo（dT）或随机引物利用逆转录酶反转录成cDNA。再以cDNA为模板进行PCR扩增，而获得目的基因或检测基因表达。RT-PCR使RNA检测的灵敏性提高了几个数量级，使一些极为微量RNA样品分析成为可能。该技术主要用于：分析基因的转录产物、获取目的基因、合成cDNA探针、构建RNA高效转录系统。

RT－PCR步骤：
1、RNA提取并除去RNA中的基因组DNA污染
2、第一链cDNA的合成
3、用目的基因的上下游引物进行PCR反应
4、琼脂糖上进行凝胶电泳
5、成像分析软件Quantity One进行半定量

PCR条件的优化：

PCR条件的优化主要是①引物退火温度的调节，一般在引物设计软件推荐温度的上下2 ℃变化寻找最佳退火温度。②此外Mg2＋浓度的调节也非常重要，通常最佳浓度为2mM左右。③引物和模板的量等。

实验要求：
1、
请您提供新鲜的且尽量多的材料，或直接提供纯化好的总RNA或DNA（大于5ug/样本）。如是如织：100－200mg
2、
请通过EMAIL提供已知的全长基因序列。Email:huameixinan@163.com
3、
请提供详细背景资料：DNA/RNA来源，丰度。
4、
在实验前请您要确保目的基因可以表达，并确保您提供的实验信息的准确性。
服务承诺：

1.本公司会在最短的时间内快速将实验完成。
2.本公司保证检测结果准确、客观、可信。

3. 本公司保证不对外公开或不向第三方提供客户相关信息。