如何克服细胞培养液中L-谷氨酰胺易降解、不可高压灭菌的缺点

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二肽谷氨酰胺（L-丙氨酰-L-谷氨酰胺）

细胞培养中稳定而不降解, 可高压灭菌, 释放最少毒性氨

      在细胞培养液中L-谷氨酰胺是大部分细胞培养基的基本成分；而L-谷氨酰胺是一种并不稳定的氨基酸，在中性的水溶液中会自发降解；需要频繁地补加L-谷氨酰胺。因而在培养操作过程中经常：（1）频繁打开盖子，增加了破坏无菌状态的可能性；（2）过多的追加L-谷氨酰胺，增加了培养基中氨的毒性水平。
       试验结果证实：在DMEM培养液分别加入二肽谷氨酰胺和L-谷氨酰胺，这两组培液在37℃环境中，每天取出样品在HPLC上检验二肽谷氨酰胺和L-谷氨酰胺的含量水平。其结果显示：二肽谷氨酰胺基本不水解，释放最少毒性氨；而L-谷氨酰胺则每天会水解释放出较多的氨，提高了培液中氨的毒性水平。

    将L-谷氨酰胺和二肽谷氨酰胺配成溶液在121℃、20分钟高压灭菌的环境中，其结果：L-谷氨酰胺在高压灭菌后被大幅降解而产生大量毒性氨，二肽谷氨酰胺在高压灭菌后基本无影响。

    二肽谷氨酰胺在细胞内被氨肽酶（E.C.3.4.11.2）所水解，产生L-谷氨酰胺和L-丙氨酸；因此在大部分细胞系统中二肽谷氨酰胺就可以象L-谷氨酰胺同样有效地被利用。二肽谷氨酰胺是最优替代物，它无需适应；既可用于贴壁细胞培养，也适合于悬浮细胞的培养。
     其优点如下：  
  （1）需要长期的孵育而不补充营养的系统。
  （2）要求最优标准化培养基进行长期的研究。
  （3）对氨敏感的培养系统。
  （4）代谢研究。
  （5）高压灭菌的培养基。
    二肽谷氨酰胺可以200mM的溶液直接加入到培养系统中来替代L-谷氨酰胺，使细胞培养的结果更可靠。

上海恒利安生物科技有限公司

已成功开发出用于细胞培养的二肽谷氨酰胺商业化产品。

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