如何高效测定热毒平颗粒中绿原酸的含量

如何高效测定热毒平颗粒中绿原酸的含量

    中国药业人才网：采用高效液相色谱(HPLC)法测定该制剂中绿原酸的含量,方法简便、快速,可用于热毒平颗粒的质量控制。
热毒平颗粒由金银花、生石膏、玄参、地黄等中药制成,具有清热解毒之功效,用于治疗流感、上呼吸道感染及各种发热等症[1]。绿原酸为该制剂主药金银花的主要有效成分,具有明显的抗炎、杀菌、抗病毒的作用。
　　　1  仪器与试药

　　   SP8800高效液相色谱仪(美国光谱物理公司)；分析之星色谱工作站；紫外FOCUS检测器。绿原酸对照品(中国药品生物制品检定所,批号110753-200413)；热毒平颗粒(天津中新药业隆顺榕制药厂,批号0602001、0602002、0602003)。乙腈为色谱纯,磷酸为分析纯,水为纯净水。

　　　2  方法与结果

　　2.1  色谱条件及系统适应性试验

　　   色谱柱：YMC公司ODS-A柱(150 mm×4.6 mm,5 μm)；流动相：乙腈-0.2%磷酸水溶液(10∶90)；流速：1.0 mL/min；柱温：室温；检测波长：327 nm；进样量：10 μL。理论板数按绿原酸峰计应不低于3 000,分离度＞1.5。色谱图见图1。

　　2.2  溶液的制备

　　2.2.1  对照品溶液的制备

　　精密称取绿原酸对照品4.24 mg,置于50 mL量瓶中,加50%甲醇溶解并稀释至刻度,摇匀,配成浓度为0.084 8 mg/mL的对照品储备溶液,10 ℃以下保存。再精密量取4 mL置10 mL量瓶中,加50%甲醇溶解并稀释至刻度,制成含绿原酸0.033 9 mg/mL的对照品溶液。

　　2.2.2  供试品溶液的制备

　　取本品7 g,精密称定,研细,混匀,取约0.5 g,精密称定,放入具塞锥形瓶中,精密加入50%甲醇25 mL,称定重量,密塞,超声处理(功率250 W,频率33 kHz) 30 min,放冷,再称定重量,用50 %甲醇补足减失的重量,摇匀,以0.45 μm微孔滤膜滤过,取续滤液作为供试品溶液。

　　2.2.3  阴性对照溶液的制备

　　按处方取除金银花的各味药材,按制法制得样品,再按“2.2.2”项下方法,制得阴性对照溶液。

　　2.3  标准曲线的建立

　　   精密吸取绿原酸浓度为0.084 8 mg/mL的对照品储备溶液1、2、4、8、10 mL,置10 mL量瓶中,加50%甲醇稀释至刻度,摇匀,在上述色谱条件下测定,以峰面积对浓度进行线性回归,得回归方程为：Y＝55 799 416X－28 478.3(r＝0.999 9)。结果表明,绿原酸检测浓度在0.084 8～0.848 μg范围内与峰面积呈良好线性关系。

　2.4  精密度试验

　　   精密吸取对照品溶液10 μL,按上述色谱条件重复进样6次,测定峰面积。结果RSD＝0.52%,表明本方法精密度良好。

　　2.5  稳定性试验

　　   取同一批号(0602001)样品,按照“2.2.2”项下方法制备供试品溶液,按上述色谱条件分别在0、1、2、4、6、8 h进样,测定绿原酸峰面积。结果RSD＝0.64%,表明供试品溶液在8 h之内稳定。

　　2.6  重复性试验

　　   取同一批号(0602001)样品精密称取0.5 g,共6份,按照“2.2.2”项下方法制备供试品溶液,按上述色谱条件测定每份样品中绿原酸含量。结果绿原酸的平均含量为1.190 mg/g, RSD＝0.88%,表明方法重复性良好。

　　2.7  加样回收率试验

　　   精密称取绿原酸对照品适量,配制成0.012 4 mg/mL的对照品储备溶液,取同一批号(0602001)样品,研细,混匀,取0.25 g,精密称定,共6份,精密加入绿原酸对照品储备溶液各25 mL,按照“2.2.2”项下方法制得供回收率用供试品溶液,按上述色谱条件测定,计算回收率。结果平均回收率为102.60%, RSD＝1.69%。结果见表1。表1  加样回收率试验结果(略)

8  样品含量测定

　　   取本品3批,按照“2.2.2”项下方法制备供试品溶液,按上述色谱条件进行测定,结果见表2。表2  样品中绿原酸含量测定结果(略)

　　3  讨论

　　   取绿原酸对照品的甲醇溶液,在190～650 nm波长范围进行扫描,在327 nm波长处有较大吸收,与2005年版《中华人民共和国药典》中金银花的测定波长一致,故测定波长选定为327 nm。
   
　　以多种比例乙腈-0.2%磷酸溶液(15∶85、13∶87、10∶90)试验选择流动相[3-5],当比例为10∶90时,绿原酸峰分离度大于1.5,保留时间为6.967 min,主峰与杂质峰分离良好,同时无干扰峰,基线平直。

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