请教几个关于膜片钳的问题

1：为何急性分离的时候要低钙或是无钙，而分离好以后要恢复钙；急性分离和原代细胞培养前的酶分离有何区别与联系？

2：吹打细胞的巴司德管是什么？是否就是平时用的滴管？一定要用什么不同口径的吗？吹打中要注意什么？

3：细胞急性分离需不需要注意无菌操作？感觉最后都是暴露在有菌的环境中，是否无菌操作就不太重要？

4：我们实验室老师说他们做膜片钳从来不补偿，比如液结电位，电容，串连电阻等，请教这样可以吗？我看书说好像误差很大的呀。

5：老师说实验室没有渗透压计？不知影响大不大？

在中国做实验TMD操蛋

 

 

 

版主想想办法吧，人气很不旺啊

引用：

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原文由 littlebush 发表于 2005-9-8 15:26:40 :

1：为何急性分离的时候要低钙或是无钙，而分离好以后要恢复钙；急性分离和原代细胞培养前的酶分离有何区别与联系？

降低钙的兴奋毒性;目的都是分离细胞,没有本质的区别.

2：吹打细胞的巴司德管是什么？是否就是平时用的滴管？一定要用什么不同口径的吗？吹打中要注意什么？

平时用的滴管在酒精喷灯上拉一下.口径细一些,吹打不可太猛.

3：细胞急性分离需不需要注意无菌操作？感觉最后都是暴露在有菌的环境中，是否无菌操作就不太重要？

不需要无菌,因为细胞在比较短的时间内(5小时内没问题)就会实验完.

4：我们实验室老师说他们做膜片钳从来不补偿，比如液结电位，电容，串连电阻等，请教这样可以吗？我看书说好像误差很大的呀。

可以,如果你不需要用来看电流的形状.

5：老师说实验室没有渗透压计？不知影响大不大？

一般配的缓冲溶液不需要再测量渗透压,如果配制准确,渗透压一般都会在290-320.

在中国做实验TMD操蛋

 请文明用语.谢谢. 

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谢谢bioguide的精彩解答，再问一个

新电极管如何处理和保存？

不太明白,

电极一般是当天用就当天拉,过夜的电极是不能用的,可能是因为变脏的原因,气泡很难排除.

引用：

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原文由 littlebush 发表于 2005-9-8 15:26:40 :

1：为何急性分离的时候要低钙或是无钙，而分离好以后要恢复钙；急性分离和原代细胞培养前的酶分离有何区别与联系？

如果你作的是心肌细胞，那我想主要是降低细胞的兴奋性，减少耗氧量。复钙的目的是使细胞恢复保证其活性；

2：吹打细胞的巴司德管是什么？是否就是平时用的滴管？一定要用什么不同口径的吗？吹打中要注意什么？

我们这用的是平时的滴管，普通的那种，吹打时贴壁动作要温柔；

3：细胞急性分离需不需要注意无菌操作？感觉最后都是暴露在有菌的环境中，是否无菌操作就不太重要？

急性分离正规来说该无菌操作，但。。。无菌操作很重要，对于实验的成败！

4：我们实验室老师说他们做膜片钳从来不补偿，比如液结电位，电容，串连电阻等，请教这样可以吗？我看书说好像误差很大的呀。

膜片钳实验必须补偿！

5：电极的保存？

一般新的电极需丙酮浸泡，24小时，超纯水冲洗干净封装待用。电极最好现用现拉！

 

 

 

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呵呵，谢谢两位，我比较同意fanping战友的意见，

丙酮浸洗时请注意，丙酮最好是纯度越高越好。
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1.分离细胞时用无钙液目的是降低细胞代谢，维持细胞活性。分离后复钙则是恢复细胞的正常生理环境。急性分离和原代细胞培养前的酶可以用同一种。

2.吹打细胞的巴司德管可用平时用的滴管代替。口径一般2毫米左右。吹打中要注意力度，不可用力太大。另外，滴管口应该用火烧一下，使其边缘钝圆。

3.细胞急性分离对无菌操作的要求并不严格

4.是的，我们实验室也不补偿，因为容易发生过补偿，而且补偿后也不一定稳定，数据更不准确

5.只要按照液体配方去配制，其最后的渗透压是可行的，不必再用渗透压计去测

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做膜片钳记录时是要补偿的,要还离子通道的本来面目,如不补偿,那各组都不补,使其在同等条件下比较也能说明问题,

我认为还是应该补偿.

其他都问题与各站友同,各实验室也不完全一样.

1.大多实验室要复钙的

2吹打要轻柔

3不需无菌,很难做到;要培养的话则无菌

5.液体配方都是考虑到渗透压的,除非你自己设计配方

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