关于SDS-PAGE的一些小技巧

#1  关于SDS-PAGE的一些小技巧

1： 电泳缓冲液的使用：
      电泳缓冲液是完全可以回收再用的 但前提是每次的内层缓冲液必须是新配的。每次在电泳完成后内外层缓冲液一起回收到一个瓶里，作为下次的外层缓冲液使用。我现在的做法就是配制新的缓冲液只作为内层使用（配制ffice:smarttags" />1L可以用很久的），每次都用回收的缓冲液作外层，效果一点都不差，即节省了试剂，又节省了时间。我的外层缓冲液已经用了一个月了，呵呵。做Western目前还没有出现问题。

2： 电泳条件的选则
      我的电泳不采用先低压再高压的常用方法，每次都是上样后直接采用200V恒压电泳，一般Bio－Rad的胶板，39分钟即可跑到头，电泳结果一点都没有影响，我在做Western时也是这个条件，现在还没出过问题。

3： 染色与脱色
     分子克隆上介绍的方法耗时太长，现在咱们实验室用Crystal的方法已经相当快了，我稍做了一下改动：染色时加入染液后，在微波炉中煮沸一次即可，切记不要喷了，这个过程大约20-30秒，在摇床上染色，这时可以去处理胶板，电泳槽，台面，待收拾干净后染色也就结束了（不要觉得染色时间太短了，已经足够了，太长了脱色也麻烦），此过程大约需要3-5分钟；回收染液，用自来水清洗几次胶，再加入适量自来水，放入微波炉中煮沸，条件与染色时一致，摇床脱色，此时你就可以做其他试验了，3-5分钟后可以再换一次清水，煮沸脱色，我的经验是一次用水脱色就可以看到Marker条带了，两次以后就可以清析的看到你的结果了，如果觉得结果不错可以留存备用，再加入脱色液，脱干净了就行了，其实用自来水多脱几次也一样，我现在很少用脱色液了，用自来水多方便啊，呵呵！
      
      以上技巧与大家分享，有用就好，可能不同蛋白条件还有差异，试验中自己调整吧。

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谢谢分享!

SDS PAGE 电泳缓冲液 很好配的,我每次都用的是新鲜的.