[原创]上海瑞基提供基因测序

测序流程及模板要求
基本测序过程：
测序接收的样品主要有四类：菌液、质粒、已纯化PCR和PCR原液。
实验室收到样品后，首先对客户填写的定单进行确认和补充。（客户姓名、单位地址、邮箱、电话、样品编号、引物编号、反应数）然后根据不同的样品类型对样品进行分类编号。

1. 测序前处理
   菌 样：将当天收取的菌样进行接种培养，过夜培养后用试剂盒进行质粒提取（免费服务项目，对于低拷贝质粒收取一定费用）。将提出的质粒跑琼脂糖胶鉴定质粒浓 度，达到规定浓度的质粒交下一组实验，未达到规定浓度的质粒和未摇出菌的样品，作好记录后重新摇菌并提取质粒，对于两次未能提出质粒或不能摇出菌的样品， 不再重复实验，E-MAIL给客户，建议客户重新挑取新的克隆样品后测序。
   PCR原液：将PCR原液上样于纯化胶后电泳检测，对浓度较高的样品进行切胶用胶回收试剂盒回收，去除PCR引物、酶和其他杂质。然后电泳检测样品浓度，达到规定浓度的PCR样品交下一组实验。浓度不高的样品将停止实验，（注：电泳后有多条带和有弥散带的样品也将停止实验，因为这样的样品通常不能得到好的测序结果）。
质粒和PCR已纯化样品：将质粒和PCR已纯化样品直接电泳检测浓度，对于不能达到规定浓度的样品将停止实验。达到规定浓度的样品交下一组实验。
2.测序反应
   将处理好的DNA模板经鉴定确定浓度，做PCR测序反应，PCR反应结束后经过一系列的纯化过程将酶、荧光染料、引物和其他离子去除。
3.上测序仪电泳
4.测序结果分析
   测序仪将自动分析电泳样品的DNA序列。分析人员对测序结果再次进行分析校对，数据分析完毕将结果通过Email发送给相应的客户。如果客户的测序结果有问题，我们将对结果进行分析并提出解决建议。

测序样品要求。
1. PCR原液
   片段通常大于200bp，小于1000bp。
   提供浓度大于50ug/ul,体积大于50ul。
   2ul电泳检测条带清晰,无非特异性杂带。
2. PCR已纯化
   割胶回收特异性单一条带，PCR纯化后产物溶于超纯水中。
   OD260/280在1.8～2.0之间,不含RNA、蛋白、基因组DNA、EDTA。
   浓度大于50 ug/ul,体积大于20ul。
   纯化后产物电泳检测条带单一。
3. 质粒要求
   质粒溶解在灭菌水中，浓度大于100 ng/ul,体积大于20ul。
   OD260/280在1.8～2.0之间,不含RNA、蛋白、基因组DNA、EDTA。
   1%琼脂糖凝胶检测质粒条带清晰，无条带压缩、拖带。
   对于低拷贝质粒请直接提供1ug纯化质粒。
   建议使用相关试剂盒提取。
   建议同时提供1ml菌液。
   大质粒需要注明载体长度。
4. 菌液模板要求
   说明载体的抗性,我们提供Amp、kan、chl。
   提供1 ml左右的过夜培养的新鲜菌液,加15%灭菌甘油,于离心管中封口保存,防止交叉污染或泄漏。
   建议尽量提供穿刺培养的菌种。
5. 引物要求
   测序引物经PAGE纯化，长度20个碱基左右。
   浓度大于5pmol/ul,体积大于20ul。
   随机引物和兼并引物不适合测序。
   尽可能提供引物全序列,PCR退火温度。
   订单上注明的通用引物我们免费提供。

6,价格:30元/反应（15个反应或以上）35元/个（15个反应以下）

免费提供通用测序引物

详情请联系上海瑞基生物科技有限公司

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